抗凍轉(zhuǎn)錄因子CBF3基因轉(zhuǎn)化歐美楊108的研究.pdf

1、歐美楊108(Populus nigraxPopulus deltoids"108")為美洲黑楊與歐洲黑楊的人工雜種無性系,為我國引進(jìn)的楊樹新品種。歐美楊108號生長速度快、適應(yīng)性強(qiáng)、材質(zhì)好,不僅是優(yōu)良的林業(yè)木材,還是一個(gè)難得的優(yōu)良速生樹種。溫度在植物生長發(fā)育中的作用極為重要,近年來我國由低溫造成的災(zāi)害不斷發(fā)生。因此,對耐低溫品種的培育和現(xiàn)有物種的改良,對于農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)及經(jīng)濟(jì)的發(fā)展具有非常重要的意義。
　　 本研究以歐美

2、楊108為受體材料,以抗凍轉(zhuǎn)錄因子CBF3為目的基因,采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行轉(zhuǎn)基因的研究。通過葉片的敏感性試驗(yàn),確定葉片分化時(shí)卡那霉素的臨界濃度為30mg/L,頭孢噻肟鈉的適宜濃度為600mg/L。對影響遺傳轉(zhuǎn)化效率的單因子變量進(jìn)行篩選,優(yōu)化了歐美楊108的遺傳轉(zhuǎn)化體系。歐美楊108葉片的遺傳轉(zhuǎn)化體系為:預(yù)培養(yǎng)時(shí)間2d,菌液濃度OD600=0.05-0.1,侵染時(shí)間3-5min,共培養(yǎng)時(shí)間3d；歐美楊108莖段的遺傳轉(zhuǎn)化體系為:預(yù)培養(yǎng)

3、時(shí)間3d,菌液濃度OD600=0.1-0.2,侵染時(shí)間5.9min,共培養(yǎng)時(shí)間2d。
　　 利用葉盤介導(dǎo)法共侵染葉盤881個(gè),獲得抗性植株41株；利用莖段為外植體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,共侵染莖段743個(gè),獲得抗性植株104株。經(jīng)PCR檢測,葉片轉(zhuǎn)化篩選出7株陽性植株,陽性率達(dá)17.1％；莖段轉(zhuǎn)化篩選出5株陽性植株,陽性率達(dá)4.8％。通過RT-PCR進(jìn)一步檢測,7株轉(zhuǎn)基因植株出現(xiàn)特異性條帶,說明外源基因已經(jīng)整合到歐美楊108基因組中并在轉(zhuǎn)