楊樹(shù)組培和歐美楊108無(wú)性系幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、楊樹(shù)具有重要的生產(chǎn)和生態(tài)價(jià)值，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中發(fā)揮著巨大作用，由于長(zhǎng)期遭受病蟲(chóng)害的侵害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，人們?yōu)榇瞬扇×烁鞣N措施來(lái)減少危害。基因工程技術(shù)的發(fā)展，將抗性基因轉(zhuǎn)化到楊樹(shù)基因組中，提高楊樹(shù)抗病蟲(chóng)害能力，為病蟲(chóng)害的控制提供了一條新途徑。 本研究建立了三種新品系楊樹(shù)歐美楊108無(wú)性系(Populus×euramericanacv.guariento')、山西楊×新疆楊(P.pyramidalisspv.×P.albavar.

2、pyramidalis)、美州楊×海拉爾楊(P.deltoids×p.pyramidalissp.)的組培系統(tǒng)，得到了適合的培養(yǎng)基和激素配比：生根培養(yǎng)基為：WPM+IBA0.4mg/L+20g/L蔗糖+5.6g/L瓊脂(pH5.6)；分化培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+20g/L蔗糖+5.6g/L(pH5.6)；對(duì)pH值、瓊脂濃度、溫度、濕度等其他影響因素也做了分析比較試驗(yàn)，建立了高頻再生體系，對(duì)楊樹(shù)基因轉(zhuǎn)

3、化和遺傳育種具有重要的理論和實(shí)踐意義。 利用CaCl2凍融法，構(gòu)建了EHA105表達(dá)載體，經(jīng)平板抗性壓篩選，選擇出抗性菌落，提取了抗性菌落質(zhì)粒DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果證明攜帶目的基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功。 為歐美楊108無(wú)性系建立了農(nóng)桿菌葉盤(pán)介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系：葉片預(yù)培養(yǎng)2～3d后，用OD600=0.3～0.5的工程菌液進(jìn)行侵染，侵染時(shí)間20min，之后置暗處共培養(yǎng)2～4d，再轉(zhuǎn)入含30mg/L卡那霉素和800mg/L頭孢噻