rol基因?qū)?41楊的遺傳轉(zhuǎn)化及表達(dá)研究.pdf

1、Ri質(zhì)粒上含有誘根基因即rol基因，將含rol基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物體內(nèi)均能提高植物的生根能力，而rol基因轉(zhuǎn)入后往往使植株表現(xiàn)出一些變異，對植物的生長發(fā)育產(chǎn)生很大的影響。為了研究rol基因?qū)χ参镌斐傻淖儺?，本?shí)驗(yàn)通過對遺傳轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化，將rolB、rolC誘根基因?qū)?41楊，對轉(zhuǎn)化植株生長變化、葉綠素含量、熒光特性，以及內(nèi)源激素含量等生理指標(biāo)進(jìn)行檢測，并對農(nóng)桿菌介導(dǎo)法中農(nóng)桿菌在轉(zhuǎn)化植株上的殘存狀況進(jìn)行研究，主要內(nèi)容及結(jié)果如下：

2、>　　 采用含rol基因的植物表達(dá)載體感染741楊葉片外植體，優(yōu)化轉(zhuǎn)化體系，獲得轉(zhuǎn)rolB基因苗8個系號，轉(zhuǎn)rolC基因苗18個系號。研究結(jié)果表明：741楊葉片在MS培養(yǎng)基附加6-BA 1.0和NAA 0.1時，分化率可提高至97％；篩選培養(yǎng)時Km臨界濃度為40 mg/L；附加400 mg/L CTX可有效抑制細(xì)菌,并減少抗生素對葉片分化的影響；侵染和共培養(yǎng)時添加AS 150 mg/L，農(nóng)桿菌侵染9-14 min，共培養(yǎng)3 d時，可將

3、轉(zhuǎn)化效率提升至51％；而預(yù)培養(yǎng)時間的延長，不利于轉(zhuǎn)化效率的提高。通過Km篩選和PCR檢測，初步確定rol基因已轉(zhuǎn)入目的植株。
　　 對轉(zhuǎn)基因植株發(fā)根量、生長變化、葉綠素含量、熒光特性，以及內(nèi)源激素含量進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：轉(zhuǎn)rolB基因各株系發(fā)根率，發(fā)根量提高。多數(shù)株系苗高與對照無顯著差異，葉綠素a、b、a+b含量上升，F(xiàn)v/Fm、PI值下降，葉綠素a、b、a+b之間呈極顯著正相關(guān)性，葉綠素a、b、a+b與PI呈負(fù)相關(guān)性，激素含量

4、存在較大變化，IAA、ZT含量上升，ABA含量下降，IAA/ABA值上升，這與發(fā)根率和發(fā)根量的變化是一致的，IAA/ZT值上升，與苗高變化存在一定差異。轉(zhuǎn)rolC基因各株系發(fā)根率、生根量提高，頂端優(yōu)勢受到抑制，植株矮化，葉綠素含量降低，葉綠素a、b、a+b之間呈極顯著正相關(guān)性，葉綠素a、b與PI呈顯著正相關(guān)性，IAA、ZT、ABA含量上升，IAA/ABA和IAA/ZT值上升，與發(fā)根量和苗高的變化一致。
　　 對轉(zhuǎn)Ri質(zhì)粒741楊