多基因轉(zhuǎn)化741楊及其基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、本文是在田穎川和鄭鈞寶等研究的轉(zhuǎn)雙抗蟲基因741楊基礎(chǔ)上，成功的轉(zhuǎn)化了Ri質(zhì)粒15834菌株，并以轉(zhuǎn)雙抗蟲基因741楊和741楊單轉(zhuǎn)Ri質(zhì)粒15834菌株為對(duì)照，研究多基因的轉(zhuǎn)化以及初步探討了多基因之間的基因表達(dá)。通過rolD基因和MAS基因，NptⅡ基因和BtCry1Ac基因的PCR檢測(cè)和外部形態(tài)差異對(duì)轉(zhuǎn)多基因植株進(jìn)行鑒定，表明多基因共存于轉(zhuǎn)基因植株中。 1.對(duì)轉(zhuǎn)多基因741楊各株系試管苗的生根率、根長(zhǎng)、根量、高生長(zhǎng)量及葉片及

2、莖形態(tài)變異進(jìn)行研究，得出大多數(shù)轉(zhuǎn)多基因741楊表現(xiàn)出Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化植物的典型特征，轉(zhuǎn)化植株的葉片均在MS0培養(yǎng)基上具有自發(fā)根的特性，形態(tài)表現(xiàn)為葉片皺縮、莖生長(zhǎng)量減少，試管苗生根率高，側(cè)根極為發(fā)達(dá)等特點(diǎn)。98﹪左右轉(zhuǎn)基因株系的生根率比對(duì)照植株都有明顯提高；轉(zhuǎn)多基因株系的根數(shù)量比對(duì)照都有增加，根發(fā)達(dá)，形成簇生根，多得幾乎無法計(jì)數(shù)；根長(zhǎng)度大多數(shù)株系明顯高于對(duì)照，有少數(shù)的株系與對(duì)照植株相似，有部分株系的根長(zhǎng)明顯短于對(duì)照；多基因轉(zhuǎn)化741毛白楊后，

3、引起轉(zhuǎn)化植株葉片增厚，葉面積明顯縮小，葉柄變短，葉面皺縮；莖節(jié)間縮短，苗高生長(zhǎng)減少，分枝數(shù)量增加，個(gè)別株系出現(xiàn)莖彎曲生長(zhǎng)，嚴(yán)重影響了苗木的正常生長(zhǎng)，但是有少量株系的植株出現(xiàn)了正常生長(zhǎng)的情況，甚至對(duì)生長(zhǎng)有一定促進(jìn)作用。 2.通過HPLC法對(duì)轉(zhuǎn)多基因741楊不同株系的植株葉片的內(nèi)源激素進(jìn)行了測(cè)定。幾乎所有轉(zhuǎn)多基因741楊株系中，植株葉片中內(nèi)源IAA含量均高于轉(zhuǎn)雙抗蟲基因741楊，植株生長(zhǎng)表現(xiàn)越矮小的葉片中IAA含量越高，大部分株系比

4、741楊單轉(zhuǎn)Ri質(zhì)粒15834菌株對(duì)照含量低。 3.采用ELISA技術(shù)，對(duì)轉(zhuǎn)多基因741楊不同株系轉(zhuǎn)基因苗和毛狀根中Bt毒蛋白進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明Bt毒蛋白在葉片和毛狀根中均有表達(dá)，葉片毒蛋白表達(dá)量明顯高于毛狀根的。轉(zhuǎn)多基因苗中不論是其葉片還是毛狀根，其毒蛋白含量大部分株系均比轉(zhuǎn)雙抗蟲基因741楊的毒蛋白含量低，比單轉(zhuǎn)Ri質(zhì)粒15834菌株的含量高。表明轉(zhuǎn)入發(fā)根農(nóng)桿菌后，其原來根癌農(nóng)桿菌毒蛋白表達(dá)含量降低了。發(fā)根農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)入對(duì)根癌