HPMCP-SN-38@PLGA-TPGS納米顆粒的制備和體外生物效應(yīng)研究.pdf

1、背景：SN-38(7-ethyl-10-hydroxy-camptothecin)是抗癌藥物喜樹堿家族中的伊立替康在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，伊立替康在肝臟和腫瘤不穩(wěn)定只有一小部分大約2％-8％可以分解為SN-38。活性代謝物SN-38是拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的抑制劑，對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的抑制作用導(dǎo)致DNA復(fù)制和翻譯這兩個(gè)過程都受到抑制。其抗腫瘤作用是伊立替康的100-1000倍。由于SN-38本身的極端疏水性、難溶性、較低的生物利用度等問題在很大程度上限

2、制了SN-38的直接臨床應(yīng)用，因此開發(fā)一種遞藥系統(tǒng)克服SN-38的這些問題使其發(fā)揮優(yōu)秀的抗腫瘤作用是很有意義和前景的。在過去的幾十年里納米遞藥系統(tǒng)被廣泛的研究，采用生物相容性好、可生物降解的材料制備出的納米遞藥系統(tǒng)可以顯著的改善藥物水溶性和穩(wěn)定性，降低藥物對(duì)機(jī)體的毒性作用。與原藥相比由于更大一點(diǎn)粒徑使得其在機(jī)體中的集聚量更多，促進(jìn)藥物的攝取和提高藥物在腫瘤組織內(nèi)的治療濃度。除此之外納米藥物遞送系統(tǒng)還具有緩釋的作用可以保證藥物在腫瘤部位持

3、續(xù)溫和的釋放。是增強(qiáng)大多難溶性抗腫瘤藥物作用效果的是一種非常有效的手段。
　　目的：采用復(fù)乳化溶劑揮發(fā)法制備一種具有堿性環(huán)境敏感的內(nèi)核、酸性環(huán)境敏感的外殼的殼-核結(jié)構(gòu)雙層納米顆粒，用于裝載藥物SN-38。使載藥納米顆粒夠通過逐級(jí)釋放的方式把藥物遞送到發(fā)揮作用的靶位置，既細(xì)胞核內(nèi)，完成藥物遞送。在實(shí)驗(yàn)中對(duì)所合成的核-殼結(jié)構(gòu)的雙層納米顆粒進(jìn)行理化性質(zhì)的表征，同時(shí)進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)胞對(duì)納米顆粒的攝取行為并探究其抗癌效果。
　

4、　方法：采用溶劑揮發(fā)法制備核-殼結(jié)構(gòu)的雙層納米顆粒。采用傅里葉紅外、X射線衍射、掃描電鏡、透射電鏡、動(dòng)態(tài)光散射儀檢測(cè)納米粒。對(duì)納米粒的理化結(jié)構(gòu)、表面形態(tài)和粒徑大小進(jìn)行檢測(cè)。利用紫外分光光度法對(duì)載藥納米顆粒的載藥量、包封率和體外釋放行為進(jìn)行檢測(cè)。采用WST-1試劑盒分別測(cè)試HPMCP NPs、HPMCP@PLGA/TPGSNPs、SN-38原藥、HPMCP/SN-38@PLGA/TPGS NPs對(duì)A549細(xì)胞存活率的影響，用于檢測(cè)材料的安

5、全性和載藥納米顆粒的細(xì)胞毒性作用。使用AnnexinV-FITC/PI試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡探究細(xì)胞的死亡是否由凋亡引發(fā)，進(jìn)一步確認(rèn)材料的安全性。使用兩種不同熒光分別標(biāo)記核-殼雙層納米顆粒，用共聚焦顯微鏡觀察納米粒在細(xì)胞內(nèi)的行為。
　　結(jié)果：⑴制備的載有SN-38的雙層納米顆粒呈表面光滑的球形，內(nèi)核納米顆粒的大小在30nm左右并且大小較為均一無團(tuán)聚現(xiàn)象，雙層納米顆粒的粒徑在240nm左右粒徑分布均一無團(tuán)聚。傅里葉紅外和X射線衍射分析表

6、明納米粒被成功的合成并且藥物在納米顆粒中表現(xiàn)為非晶體狀態(tài)。內(nèi)核納米顆粒的包封率為90.97％，載藥量為4.95％。雙層納米顆粒的包封率為86.91％，載藥量為1.32％。體外藥物釋放實(shí)驗(yàn)表明，內(nèi)殼顆粒在偏堿性的環(huán)境下釋放較好，酸性釋放量甚微。雙層納米顆粒的釋放隨pH變化具有不同的釋放行為。⑵WST-1檢測(cè)結(jié)果顯示材料本身對(duì)細(xì)胞并沒有毒性作用，載有SN-38的雙層納米顆粒與SN-38原藥相比對(duì)A549細(xì)胞的毒性顯著增強(qiáng)。細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)表明用

7、納米顆粒處理的A549細(xì)胞產(chǎn)生的死亡，大多是以細(xì)胞凋亡的形式發(fā)生的，進(jìn)一步證明了材料的安全性。⑶通過共聚焦顯微鏡觀察，雙層納米粒在細(xì)胞內(nèi)的行為是雙層納米顆粒在細(xì)胞質(zhì)中釋放出內(nèi)核小納米顆粒，之后小納米顆粒遷移進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，具有多級(jí)釋放行為。
　　結(jié)論：制備的雙層納米顆粒能夠直接把藥物遞送到靶位置細(xì)胞核中，提高SN-38的溶解性并且減少藥物被外排和降解的量，提高其有效作用濃度，從而降低了對(duì)機(jī)體的毒害作用同時(shí)增強(qiáng)藥物的抗腫瘤效果。表明這