TPGS2k-PLGA納米粒逆轉(zhuǎn)肺腺癌細(xì)胞多藥耐藥效應(yīng)及機制研究.pdf

1、背景：
　　維生素E的水溶性衍生物(TPGS)是一種高效的乳化劑、增溶劑、吸收促進劑，不僅可以提升納米材料的包封率，還可以控制藥物釋放，同時在納米顆粒表面構(gòu)成空間位阻，對納米顆粒起到保護作用。新型TPGS(TPGS2k)在維持高效的乳化作用的同時，加長的親水側(cè)鏈更有利于藥物酸性環(huán)境的釋放，維持納米粒穩(wěn)定，延長循環(huán)滯留時間，降低肝臟蓄積。TPGS2k所攜帶的親酯性的維生素E(α-TOS)頭部，被認(rèn)為是P-糖蛋白介導(dǎo)的多藥耐藥的抑制劑

2、，廣泛用于多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的研究。
　　目的：
　　本研究采用mPEG2k和α-TOS為材料合成TPGS2k，使用合成的TPGS2k為乳化劑，進一步修飾PLGA納米顆粒，并加載模式藥物SN-38。對合成的納米顆粒進行必要的理化表征，并探究其對耐藥細(xì)胞株的抗癌效應(yīng)。同時，從攝取、外排、耗氧等方面，初步探究修飾后的納米材料的作用機制。
　　方法：
　　材料制備:參照公開發(fā)表的方法合成TPGS2k，并進行傅里葉紅外和核磁共

3、振檢測，進行結(jié)構(gòu)確證。使用合成TPGS2k，利用乳化溶劑揮發(fā)法合成納米粒，并采用掃描電子顯微鏡、動態(tài)光散射儀、X射線衍射儀、差示掃描量熱等進行形態(tài)和理化確認(rèn)。利用紫外分光光度法對納米顆粒的載藥率、包封率和體外釋放進行檢測。
　　安全性評價:利用WST-1試劑盒檢測TPGS2k和納米粒對細(xì)胞生存能力的影響，使用AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒進行凋亡檢測，探究材料所引發(fā)的細(xì)胞死亡是由毒性引發(fā)還是由凋亡所引起。
　　機理研

4、究:制備載香豆素-6的納米顆粒，同游離香豆素-6進行對比，使用共聚焦顯微鏡觀察材料的入胞情況。制備載羅丹明-123的納米顆粒，同游離的羅丹明-123進行對比，使用共聚焦顯微鏡觀察材料對外排作用的影響。使用透射電鏡觀察納米粒對細(xì)胞和線粒體形態(tài)的影響，使用XF96線粒體檢測試劑盒檢測納米粒對細(xì)胞耗氧的影響。
　　結(jié)果：
　　1.傅里葉紅外和核磁共振結(jié)果顯示，本研究成功合成了TPGS2k。使用TPGS2k修飾的PLGA納米粒，表面

5、光滑，無團聚現(xiàn)象，粒徑分布較均勻，大都在100納米左右。XRD和DSC證明了納米粒的成功合成和藥物的非晶體形態(tài)。納米粒包封率為83.6％，載藥率為7.35％，均達(dá)到了較高水平。體外藥物釋放顯示，在酸性環(huán)境下釋放較好，并且可以實現(xiàn)藥物的持續(xù)釋放可避免毒副作用。
　　2.WST-1實驗結(jié)果顯示，各處理組細(xì)胞生存率均超過70％，達(dá)到了較高水平，表明材料毒性較低。AnnexinⅤ-FITC/PI檢測結(jié)果顯示，材料所引起的細(xì)胞死亡，大都以細(xì)

6、胞凋亡形式引發(fā)，進一步印證了材料的安全性。
　　3.通過共聚焦顯微鏡觀察，納米粒能夠增加細(xì)胞攝?。?h時提高141.5％），同時抑制P-gp對底物的外排。進一步研究表明，納米顆粒逆轉(zhuǎn)P-g介導(dǎo)的多藥耐藥，與影響線粒體形態(tài)，干擾線粒體功能，抑制線粒體有氧呼吸，降低能量產(chǎn)生等有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　本研究成功合成了TPGS2k并制備了TPGS2k修飾的PLGA納米粒(TPGS2k/PLGA NPs、TPGS2k/PLGA/