高頻再生的玉米成熟胚遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立.pdf

1、成功的遺傳轉(zhuǎn)化首先依賴于良好的受體系統(tǒng)的建立。幼胚是玉米轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的主要外植體，成熟胚與之相比具有操作便利，不受時(shí)間和數(shù)量限制的優(yōu)勢(shì)。利用成熟胚建立的組織培養(yǎng)體系將是一種理想的轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。但玉米成熟胚是比較難于誘導(dǎo)、再生的外植體，并且受到基因型的限制。如何從大量基因型中篩選可以由成熟胚高效誘導(dǎo)胚性愈傷組織并能高頻再生的基因型一直是玉米成熟胚研究的重點(diǎn)所在。本文作者在此領(lǐng)域借助多種手段進(jìn)行了大量的研究工作，主要獲得了以下結(jié)果：

2、 1、對(duì)71個(gè)基因型的玉米成熟胚進(jìn)行研究。在研究中依據(jù)初級(jí)愈傷組織和次級(jí)愈傷組織的狀態(tài)將應(yīng)試材料分組，建立了玉米成熟胚誘導(dǎo)和繼代能力的2個(gè)評(píng)價(jià)體系，并由此篩選出CML295、CML304和18-599R 3個(gè)基因型作為主要研究對(duì)象，這3個(gè)基因型的成熟胚誘導(dǎo)胚性愈傷組織效率分別達(dá)到了37.1％，35.8％和30.7％。 2、成熟胚來源的胚性愈傷組織在幼胚繼代培養(yǎng)基上生長旺盛，增殖迅速。在含有2mg/L 6-BA的幼胚分化培養(yǎng)基上，

3、以上3個(gè)基因型的分別獲得了68.6％、75.4％和84.8％的高頻再生率，每愈傷成苗數(shù)分別為2.45、2.43和2.75。 3、對(duì)成熟胚誘導(dǎo)的愈傷組織的不同時(shí)期進(jìn)行了組織切片觀察。結(jié)果顯示：初級(jí)愈傷組織是處于脫分化過程的外植體；次級(jí)愈傷組織表面的顆粒狀凸起是分生組織結(jié)節(jié)；胚性愈傷組織在分生組織結(jié)節(jié)上產(chǎn)生；成熟胚誘導(dǎo)的胚性愈傷組織與幼胚來源的胚性愈傷組織結(jié)構(gòu)相同。 4、利用成熟胚誘導(dǎo)的胚性愈傷組織進(jìn)行基因槍法的遺傳轉(zhuǎn)化研究

4、。結(jié)果表明，以上3個(gè)基因型轉(zhuǎn)化pCAMBIA1301質(zhì)粒后的GUS染色效率分別為57.9％、62.5％、73.1％，轉(zhuǎn)化pCAMBIA1303質(zhì)粒后檢測(cè)gfp的表達(dá)效率分別為23.3％、40％和45.5％。轉(zhuǎn)化率與其對(duì)應(yīng)的幼胚來源的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)化率相似。 本研究創(chuàng)新性的將玉米成熟胚誘導(dǎo)愈傷組織的方法與幼胚組織培養(yǎng)體系相結(jié)合，優(yōu)化了成熟胚來源的胚性愈傷組織的繼代培養(yǎng)方法。組織切片、再生誘導(dǎo)和遺傳轉(zhuǎn)化的結(jié)果均證明，本研究建立的成熟