高頻再生的玉米成熟胚遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的建立.pdf

1、成功的遺傳轉(zhuǎn)化首先依賴于良好的受體系統(tǒng)的建立。幼胚是玉米轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的主要外植體，成熟胚與之相比具有操作便利，不受時間和數(shù)量限制的優(yōu)勢。利用成熟胚建立的組織培養(yǎng)體系將是一種理想的轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)。但玉米成熟胚是比較難于誘導、再生的外植體，并且受到基因型的限制。如何從大量基因型中篩選可以由成熟胚高效誘導胚性愈傷組織并能高頻再生的基因型一直是玉米成熟胚研究的重點所在。本文作者在此領域借助多種手段進行了大量的研究工作，主要獲得了以下結(jié)果：

2、 1、對71個基因型的玉米成熟胚進行研究。在研究中依據(jù)初級愈傷組織和次級愈傷組織的狀態(tài)將應試材料分組，建立了玉米成熟胚誘導和繼代能力的2個評價體系，并由此篩選出CML295、CML304和18-599R 3個基因型作為主要研究對象，這3個基因型的成熟胚誘導胚性愈傷組織效率分別達到了37.1％，35.8％和30.7％。 2、成熟胚來源的胚性愈傷組織在幼胚繼代培養(yǎng)基上生長旺盛，增殖迅速。在含有2mg/L 6-BA的幼胚分化培養(yǎng)基上，

3、以上3個基因型的分別獲得了68.6％、75.4％和84.8％的高頻再生率，每愈傷成苗數(shù)分別為2.45、2.43和2.75。 3、對成熟胚誘導的愈傷組織的不同時期進行了組織切片觀察。結(jié)果顯示：初級愈傷組織是處于脫分化過程的外植體；次級愈傷組織表面的顆粒狀凸起是分生組織結(jié)節(jié)；胚性愈傷組織在分生組織結(jié)節(jié)上產(chǎn)生；成熟胚誘導的胚性愈傷組織與幼胚來源的胚性愈傷組織結(jié)構(gòu)相同。 4、利用成熟胚誘導的胚性愈傷組織進行基因槍法的遺傳轉(zhuǎn)化研究

4、。結(jié)果表明，以上3個基因型轉(zhuǎn)化pCAMBIA1301質(zhì)粒后的GUS染色效率分別為57.9％、62.5％、73.1％，轉(zhuǎn)化pCAMBIA1303質(zhì)粒后檢測gfp的表達效率分別為23.3％、40％和45.5％。轉(zhuǎn)化率與其對應的幼胚來源的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)化率相似。 本研究創(chuàng)新性的將玉米成熟胚誘導愈傷組織的方法與幼胚組織培養(yǎng)體系相結(jié)合，優(yōu)化了成熟胚來源的胚性愈傷組織的繼代培養(yǎng)方法。組織切片、再生誘導和遺傳轉(zhuǎn)化的結(jié)果均證明，本研究建立的成熟