非洲菊（Gerbera jamesonii Bolus）再生體系及遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)建立的研究.pdf

1、非洲菊是世界五大切花之一，深受人們的喜愛。隨著非洲菊組織培養(yǎng)技術(shù)的逐步發(fā)展和基因工程技術(shù)在各種花卉上的廣泛應(yīng)用，非洲菊遺傳轉(zhuǎn)化育種作為一種重要的育種手段受到越來越多人的重視。良好的受體系統(tǒng)是進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化研究的基礎(chǔ)，本研究正是以此為著眼點(diǎn)進(jìn)行了一系列的試驗(yàn)，由最基本的非洲菊再生體系的建立直至遺傳轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)的最終建成。在整個(gè)研究過程中，首先探討和分析了非洲菊在誘導(dǎo)、分化和生根三個(gè)生長(zhǎng)階段的各種影響因素；其次分析了影響非洲菊受體系統(tǒng)再生出芽

2、的各種可能因子，包括培養(yǎng)基的篩選、硝酸銀的使用、苗齡間的差異、對(duì)受體的不同處理以及抗生素的使用和篩選(卡那霉素、頭孢霉素、羧芐青霉素)。主要研究結(jié)果如下： 再生體系的建立：通過比較以葉片和花托為外植體的愈傷組織的誘導(dǎo)和分化，其結(jié)果表明花托是非洲菊組織培養(yǎng)較為適合的外植體類型。3個(gè)不同品種非洲菊的幼嫩葉片在A-F等各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，均能誘導(dǎo)出愈傷組織，但沒有芽的分化；4個(gè)不同品種非洲菊的幼小花托在所設(shè)各種培養(yǎng)基中均能誘導(dǎo)出愈傷組織

3、，但只有YY和213品種在6-BA5.0mg/L+NAA0.2mg/L上能夠誘導(dǎo)分化出芽，出芽頻率分別為50-60﹪和50﹪。YY和213的繼代增殖培養(yǎng)基為6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。在生根方面，綜合比較根長(zhǎng)和根數(shù)兩種參數(shù)的結(jié)果是213以R1(IAA為0.5mg/L)好；YY以R4(NAA0.2mg/L)為好。 受體系統(tǒng)的建立：以YY和213品種試管苗葉片為外植體建立的受體系統(tǒng)最適培養(yǎng)基激素組合為6-BA4.0

4、mg/L+NAA0.01mg/L，在此培養(yǎng)基上二者的分化頻率最大分別達(dá)到23.1﹪和20.7﹪；添加一定濃度的硝酸銀溶液后，213品種的分化頻率均有較大提高，但以0.5-2.0mg/L處理較為適宜。不同苗齡的213品種在該濃度范圍內(nèi)，將外植體進(jìn)行四種不同方式的處理(D、Z、S、B)，發(fā)現(xiàn)21天的試管苗以S法接入最好，分化頻率可以維持在75﹪，比對(duì)照提高了近2.4倍。以卡那霉素為抗性植株的選擇劑，其選擇壓力以25mg/L為宜，在此濃度下，

5、無論是S法還是Z法，受體出芽頻率比對(duì)照都有不同程度的下降，而且新長(zhǎng)出的芽出現(xiàn)了白化癥狀。作為抑菌劑的頭孢霉素和羧芐青霉素，對(duì)受體芽再生的影響不同：在200-500mg/L的濃度范圍內(nèi)，盡管頭孢霉素在較高濃度時(shí)(400-500mg/L)對(duì)213品種的愈傷組織發(fā)生有抑制作用，但在整個(gè)濃度范圍內(nèi)對(duì)兩個(gè)品種均表現(xiàn)出抑制分化出芽的跡象。羧芐青霉素對(duì)兩個(gè)品種的愈傷組織發(fā)生似乎沒有影響，但在適宜的濃度下卻能促進(jìn)芽的分化——YY在500mg/L時(shí)，分化