大鼠肌肉挫傷后肌鈣蛋白Ⅰ mRNA表達與損傷時間關系的研究.pdf

1、目的：應用實時熒光定量PCR技術檢測大鼠肌肉挫傷后骨骼肌肌鈣蛋白Ⅰ(skeletaltroponinⅠ，sTnI)mRNA表達，探尋其時序性表達規(guī)律，探討sTnImRNA表達變化應用于損傷時間推斷的可行性，旨在為法醫(yī)學早期損傷時間的推斷提供科學依據(jù)。 方法：選取健康成年雄性SD大鼠63只，隨機分為正常對照組(6只)、死后損傷組(9只)和生前損傷組(48只)。均實施麻醉、褪毛后，利用改進的自由落體裝置，250g重力錘自150cm高

2、度垂直自由落下，造成大鼠右后肢大腿內(nèi)側肌群挫傷。損傷后0.5h、1h、6h、12h、18h、24h、30h、36h八個時間點(每個時間點6只)取挫傷處肌肉組織50mg，置于液氮中保存?zhèn)溆茫徽φ战M大鼠未打擊造傷；死后損傷組脫頸處死后，自由落體打擊同一部位，其余處理與實驗組相同。以膜吸附技術為基礎的SV Total RNA Isolation System提取肌肉組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈，梯度濃度稀釋cDNA原液分別

3、制作sTnI和參比基因的相對定量標準曲線；選取管家基因核糖體蛋白L32(RibosomalProteinL32，RPL32)為參比基因，利用SYBR GreenⅠ嵌合熒光法實時定量PCR檢測sTnImRNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA的相對表達量，分別與損傷時間進行統(tǒng)計學分析。 結果： (1)Agilent2100芯片生物分析儀和2％甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測總RNA純度、濃度及完整性較好，均可滿足下一步實驗的要求。 (2

4、)sTnI與參比基因RPL32擴增效率分別為103.6％和100.5％，一致性較好，說明參比基因選擇正確；擴增曲線拐點清楚，基線平而無上揚現(xiàn)象，說明引物設計特異性強、反應性能良好；sTnI基因融解溫度為88℃，RPL32基因融解溫度為84℃，兩者融解曲線均為單一峰型，基底窄而峰高，表明并無引物二聚體等非特異性擴增產(chǎn)生。 (3)大鼠骨骼肌挫傷后sTnI mRNA表達明顯下調(diào)(P＜0.05)，挫傷后0.5h、1h、6hsTnI mR

5、NA表達量分別為正常組的78.17％、41.58％、32.13％且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，6h～36h sTnI mRNA表達量與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (4)為了比較生前損傷組正常肌肉與損傷肌肉中sTnI mRNA的表達水平，選取挫傷后18h組大鼠左后肢同一部位取材。結果表明正常肌肉中sTnI mRNA表達與正常對照組相比無差異(P＞0.05)，而同一個體損傷肌肉中sTnI mRNA表達與正常

6、肌肉中sTnI mRNA表達存在差異(P＜0.05)。 (5)與正常對照組相比，死后損傷組雙后肢sTnl mRNA的量約下降了30％(P＜0.05)，死后損傷組各時間點sTn ImRNA的量無差異(P＞0.05)。 結論： (1)生前損傷組正常肌肉中sTnI mRNA表達與正常對照組相比無差異(P＞0.05)，而同一個體損傷肌肉中sTnI mRNA表達與正常肌肉中sTnI mRNA表達存在差異(P＜0.05)，s