大鼠閉合性彌漫性腦損傷后BudU-Nestin的表達與損傷時間的關(guān)系.pdf

1、背景與目的
　　 在法醫(yī)學(xué)檢驗中,經(jīng)常遇到外傷性腦損傷(TBI),對TBI的研究具有重要的現(xiàn)實意義,要著手對TBI進行研究,首先要有一個適當?shù)膿p傷模型。建立理想的、符合實際的TBI模型對損傷的研究意義重大。Marmarou建立的閉合性彌漫性腦組織損傷模型雖然很接近于人類受傷實際的情況,但是該模型在應(yīng)用中存在一些缺點。本實驗在Marmarou模型的基礎(chǔ)上進行改造性的研究。
　　 對彌漫性腦損傷患者損傷后的經(jīng)過時間進行推斷,

2、是我們法醫(yī)工作中的一個難點和重點,需要查找一些與損傷經(jīng)過時間有良好相關(guān)性的生物學(xué)標志。本文欲通過對彌漫性腦組織損傷后神經(jīng)細胞的增殖情況及神經(jīng)干細胞的變化情況進行研究,探討神經(jīng)細胞的變化與彌漫性腦組織損傷時間的關(guān)系,以期待為解決損傷時間的判斷提供一定的理論依據(jù)。
　　 第一部分大鼠閉合性彌漫性腦損傷模型的建立
　　 方法：
　　 1、將實驗動物分為對照組和傷后1小時、6小時、12小時、24小時、72小時、168小時

3、組,每組6只。
　　 2、采用自制損傷裝置制作動物腦組織損傷模型。
　　 3、對動物受打擊后的行為表現(xiàn)進行觀察。
　　 4、采用HE染色及Bielschowsky銀染對不同組腦組織的損傷情況進行病理學(xué)觀察研究。
　　 結(jié)果：
　　 1、損傷后行為學(xué)觀察:受打擊后多數(shù)大鼠出現(xiàn)昏迷,自主呼吸和心率改變,豎毛和全身痙攣等現(xiàn)象。
　　 2、損傷后大體觀察:腦組織可見輕度水腫,表面顏色不均勻。

4、>　　 3、HE染色變化:腦組織損傷后在不同時間段內(nèi)出現(xiàn):神經(jīng)元腫脹,散在性出血,毛細血管通透性增加,腦組織疏松,神經(jīng)細胞變性壞死,毛細血管周圍大量炎性細胞浸潤,膠質(zhì)細胞結(jié)節(jié),膠質(zhì)細胞聚集等現(xiàn)象。
　　 4、Bielschowsky銀染變化:大鼠受打擊后腦組織在不同時間段可見:軸索增粗、斷裂,神經(jīng)纖維排列紊亂,出現(xiàn)波浪樣改變,有軸索球形成等現(xiàn)象。
　　 第二部分閉合性彌漫性腦損傷后BrdU/Nestin的表達與損傷時間

5、的關(guān)系
　　 方法：
　　 1、將大鼠分為對照組和傷后1天、3天、7天、14天、28天組,每組6只。
　　 2、采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測不同時間段內(nèi)腦組織中BrdU、Nestin的表達。
　　 3、采用BrdU/Nestin免疫熒光組織化學(xué)雙重標記技術(shù)檢測不同時間段內(nèi)腦組織中BrdU/Nestin的共表達。
　　 4、用Image-Pro Plus5.0進行圖像分析,用SPSS10.0進行統(tǒng)計學(xué)分

6、析。
　　 結(jié)果：
　　 1、損傷后BrdU表達的變化:對照組中,在皮質(zhì)、海馬和室下區(qū)可見到少量的BrdU陽性細胞。損傷后1天,在皮質(zhì)、海馬和室下區(qū)BrdU的表達較對照組顯著增加(P<0.05)；在損傷后7天表達達到高峰(P<0.05),到損傷后28天皮質(zhì)、海馬BrdU的表達恢復(fù)至正常水平,室下區(qū)BrdU的陽性細胞數(shù)量高于對照組水平(P<0.05)。
　　 2、損傷后Nestin表達的變化:正常對照組中,在室下區(qū)

7、、海馬、室管膜上皮細胞、側(cè)腦室外側(cè)角等處可見較多的Nestin陽性細胞。損傷后1天Nestin陽性表達主要分布于室下區(qū)、側(cè)腦室外側(cè)角、海馬,在皮層也有一定量表達,表達程度均高于對照組(P<0.05)。在損傷后7天表達達到高峰(P<0.05),到傷后28天皮質(zhì)的表達和對照組比較仍有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、損傷后同一部位BrdU和Nestin表達的變化:在皮質(zhì)、海馬、室下區(qū)BrdU和Nestin的表達,均在損傷后1天

8、開始處于上升趨勢,至傷后7天達到峰值,隨后呈下降趨勢至傷后28天仍可見表達,整個過程呈不同程度“拋物線”式的變化。
　　 4、損傷后室下區(qū)BrdU+和Nestin的共表達:損傷后可見BrdU+/Nestin細胞,損傷后3天和7天較多,到傷后28天仍可見到少量雙標陽性細胞,整個過程呈“拋物線”式變化。
　　 結(jié)論：
　　 1、實驗利用自制裝置成功的建立了大鼠閉合性彌漫性腦組織損傷模型。
　　 2、實驗所建立

9、的模型符合人體損傷的實際情況,在此基礎(chǔ)上建立的對于彌漫性腦組織損傷經(jīng)過時間的推斷,也更容易應(yīng)用于法醫(yī)工作的實踐。
　　 3、大腦受損后可引起皮質(zhì)、海馬和室下區(qū)的BrdU和Nestin的表達增強。
　　 4、損傷后BrdU和Nestin的表達均呈現(xiàn)出與損傷時間相關(guān)的時程規(guī)律性,提示這兩項指標或許可以用于腦組織損傷時間的推斷。
　　 5、損傷后BrdU和Nestin存在共表達現(xiàn)象,反應(yīng)出神經(jīng)干細胞的增殖變化,進一步研