2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:應(yīng)用免疫組化(SABC法)、免疫印跡(Western blot)法及實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測大鼠腦挫傷后腦組織中NF-κB的表達(dá)規(guī)律,探討NF-κB表達(dá)與腦損傷經(jīng)過時間的關(guān)系,以期為法醫(yī)學(xué)實踐中早期推斷腦損傷時間提供科學(xué)的實驗依據(jù)。
   方法:選取64只健康成年SD大鼠,雌雄不限,體重250±10g(由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供),隨機(jī)分為實驗組(n=56)及對照組(n=8),實驗組依據(jù)損傷時間不同再分為7個亞

2、組。對大鼠實施麻醉后,實驗組采用自由落體打擊法于顱骨中線旁3mm處造成腦挫傷模型,于損傷后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七個時間點(每個時間點8只)取挫傷處腦組織用常規(guī)蘇木素-伊紅染色技術(shù)(hematoxylin and eosin,HE)對大鼠腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、NF-κB的分布特征進(jìn)行光鏡觀察,同時另取100mg,置于-80℃液氮中保存?zhèn)溆茫粚φ战M大鼠僅鉆孔處理,但不受打擊,其余處理與實驗組相

3、同。應(yīng)用免疫組化(SABC)法、免疫印跡(Western blot)法及實時熒光定量RT-PCR技術(shù)結(jié)合圖像分析技術(shù)半定量檢測大鼠腦組織NF-κB含量的變化,并與對照組作比較。將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
   結(jié)果:(1)紫外-可見光分光光度計檢測RNA度、濃度及完整性較好,可以滿足下一步實驗的要求;(2)NF-κB分別與內(nèi)參基因rpL32擴(kuò)增效率一致,說明內(nèi)參基因選擇正確,引物設(shè)計特異性強、反應(yīng)性能良好;(3)免疫組化(SAB

4、C)法、大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1h即有少量NF-κB陽性細(xì)胞,48h陽性細(xì)胞明顯增加并達(dá)到峰值,72h隨后逐漸減少,7d后偶見陽性細(xì)胞,14d后未見陽性細(xì)胞。(4)免疫印跡(Western blot)法,大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1h NF-κB蛋白增加,12-48達(dá)高峰,72h后下降,14d基本恢復(fù)到正常水平(5)實時熒光定量RT-PCR法,大鼠腦挫傷后在腦組織中于傷后1 h NF-κBmRNA表達(dá)即快速增加,4h后逐漸下降,

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