AtMAP65-1可能參與調(diào)節(jié)保衛(wèi)細(xì)胞微管排列方式的實(shí)驗(yàn)依據(jù).pdf

1、高等植物氣孔保衛(wèi)細(xì)胞作為公認(rèn)的一種典型而又發(fā)達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)體系，對(duì)干旱、低溫等環(huán)境脅迫均能作出快速有效的反應(yīng)。在全球生態(tài)環(huán)境破壞同趨嚴(yán)重的今天，氣孔運(yùn)動(dòng)過程中的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制一直是眾多科研工作者研究的熱點(diǎn)。光、C02、ABA、}t202、NO、蛋白激酶、蛋白磷酸酶、細(xì)胞骨架等多種因素都能影響保衛(wèi)細(xì)胞氣孔運(yùn)動(dòng)。本文以植物微管結(jié)合蛋白AtMAP65-1為研究對(duì)象，從擬南芥總基因組中克隆獲得編碼微管結(jié)合蛋白AtMAP65-1的基因，構(gòu)建35S驅(qū)動(dòng)

2、的AtMAP65-1-GFP融合基因植物表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌浸染法轉(zhuǎn)入擬南芥獲得轉(zhuǎn)基因植株。為了研究AtMAP65-1在保衛(wèi)細(xì)胞中的定位及與細(xì)胞內(nèi)微管的關(guān)系，為進(jìn)一步研究AtMAP65-1在氣孔運(yùn)動(dòng)中的作用打下基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)用激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)基因植株葉片中AtMAP65-1-GFP 的分布情況發(fā)現(xiàn)：①在光誘導(dǎo)的開放氣孔保衛(wèi)細(xì)胞中．dtMAP65-1-GFP成束并沿細(xì)胞腹壁向背壁呈有規(guī)則的輻射狀分布；②用微管特異性抑制劑長春花堿處理葉

3、片90min后，隨著微管的解聚及氣孔開度的減小，AtMAP65-1-GFP束也變成小片段。將處理時(shí)間延長至120min后，葉片中AtMAP65-1-GFP呈點(diǎn)狀彌散在整個(gè)保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)；③黑暗處理的葉片保衛(wèi)細(xì)胞中，AtMAP65-1-GFP也呈點(diǎn)狀隨機(jī)分布在保衛(wèi)細(xì)胞中。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：保衛(wèi)細(xì)胞中的AtMAP65-1-GFP結(jié)合到微管上與微管共定位，并可能參與調(diào)節(jié)周質(zhì)微管的排列方式，這有助于我們深入研究AtMAP65-1-GFP在氣孔運(yùn)動(dòng)中