AtMAP65-1可能參與調節(jié)保衛(wèi)細胞微管排列方式的實驗依據.pdf

1、高等植物氣孔保衛(wèi)細胞作為公認的一種典型而又發(fā)達的信號轉導體系，對干旱、低溫等環(huán)境脅迫均能作出快速有效的反應。在全球生態(tài)環(huán)境破壞同趨嚴重的今天，氣孔運動過程中的信號轉導機制一直是眾多科研工作者研究的熱點。光、C02、ABA、}t202、NO、蛋白激酶、蛋白磷酸酶、細胞骨架等多種因素都能影響保衛(wèi)細胞氣孔運動。本文以植物微管結合蛋白AtMAP65-1為研究對象，從擬南芥總基因組中克隆獲得編碼微管結合蛋白AtMAP65-1的基因，構建35S驅動

2、的AtMAP65-1-GFP融合基因植物表達載體，利用農桿菌浸染法轉入擬南芥獲得轉基因植株。為了研究AtMAP65-1在保衛(wèi)細胞中的定位及與細胞內微管的關系，為進一步研究AtMAP65-1在氣孔運動中的作用打下基礎，本實驗用激光共聚焦顯微鏡觀察轉基因植株葉片中AtMAP65-1-GFP 的分布情況發(fā)現(xiàn)：①在光誘導的開放氣孔保衛(wèi)細胞中．dtMAP65-1-GFP成束并沿細胞腹壁向背壁呈有規(guī)則的輻射狀分布；②用微管特異性抑制劑長春花堿處理葉

3、片90min后，隨著微管的解聚及氣孔開度的減小，AtMAP65-1-GFP束也變成小片段。將處理時間延長至120min后，葉片中AtMAP65-1-GFP呈點狀彌散在整個保衛(wèi)細胞內；③黑暗處理的葉片保衛(wèi)細胞中，AtMAP65-1-GFP也呈點狀隨機分布在保衛(wèi)細胞中。以上實驗結果表明：保衛(wèi)細胞中的AtMAP65-1-GFP結合到微管上與微管共定位，并可能參與調節(jié)周質微管的排列方式，這有助于我們深入研究AtMAP65-1-GFP在氣孔運動中