單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增聯(lián)合比較基因組雜交方法的建立及初步研究.pdf

1、比較基因組雜交技術(shù)因其僅通過(guò)一次試驗(yàn)就可以得到染色體擴(kuò)增或缺失的詳細(xì)信息而廣泛應(yīng)用于分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，將單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)與比較基因組技術(shù)相聯(lián)合就可以解決痕量標(biāo)本的全面分子遺傳學(xué)檢測(cè)的難題，在臨床及法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有著很好的應(yīng)用前景。目的：建立單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)，并在此基礎(chǔ)上摸索適于分析單細(xì)胞遺傳學(xué)信息的比較基因組雜交技術(shù)的條件。方法：以單個(gè)人外周血淋巴細(xì)胞為材料，采用寡核苷酸引物聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增單細(xì)胞全基因組，并研究新鮮細(xì)胞與冷藏細(xì)胞

2、及采用新鮮和凍存的細(xì)胞裂解物為模板對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物的均勻性及特異性的影響；以單細(xì)胞擴(kuò)增產(chǎn)物為標(biāo)本，通過(guò)研究單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增產(chǎn)物的均勻性及片段大小、切口平移中不同片段大小的酶切片段、中期染色體玻片制作及變性時(shí)間對(duì)雜交效果的影響，建立能夠全面、準(zhǔn)確進(jìn)行遺傳學(xué)分析的比較基因組雜交技術(shù)，并對(duì)雜交結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，選擇良好雜交效果的中期染色體進(jìn)行軟件分析；以來(lái)源于特納綜合征患者的淋巴細(xì)胞為材料，行已建立好的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增聯(lián)合比較基因組雜交技術(shù)進(jìn)行分析

3、，對(duì)所建立方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：在單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增中，以新鮮的淋巴細(xì)胞為模板與以冷藏的淋巴細(xì)胞為模板相比，擴(kuò)增產(chǎn)物的均勻性相當(dāng)，特異性上新鮮細(xì)胞較好；細(xì)胞裂解后立即進(jìn)行擴(kuò)增的效果在產(chǎn)物的均勻性及特異性方面均明顯優(yōu)于凍存的細(xì)胞裂解物。擴(kuò)增產(chǎn)物均勻且擴(kuò)增片段介于200-2000bp左右，切口平移中酶切片段大小為100-1500bp范圍的片段，中期染色體玻片的變性時(shí)間為3.5分鐘，產(chǎn)生的雜交效果最好。在對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本行所建立的方法進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)軟