翁連解毒湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠IL-13、TLR4表達(dá)的影響.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是一種病因尚不明確的直腸和結(jié)腸慢性非特異性炎癥性疾病。病情輕重不一，反復(fù)發(fā)作，且病程較長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察翁連解毒湯對(duì)UC模型大鼠一般情況、疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分、結(jié)腸組織病理學(xué)形態(tài)、白細(xì)胞介素-13（IL-13）及Toll樣受體4（TLR4）表達(dá)的影響，探討翁連解毒湯治療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)理，并為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：60只Wistar雄性健康清潔級(jí)大鼠（體重220g-250g）適應(yīng)性喂

2、養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（CK組）、模型組（MG組）、美沙拉嗪組（MS組）、中藥高劑量組（HD組）、中劑量組（MD組）及低劑量組（LD組）6組，每組10只，予常規(guī)飼養(yǎng)。除CK組外，其余各組大鼠均采用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇聯(lián)合造模法設(shè)計(jì) UC大鼠模型。造模成功后第4天開始，CK組不做特殊處理，MG組予4ml/kg生理鹽水灌胃，MS組予美沙拉嗪混懸液灌胃，中藥各組大鼠分別予相應(yīng)劑量的藥物灌胃，連續(xù)藥物干預(yù)2周后觀察治

3、療期間大鼠精神狀態(tài)、食量、體重以及糞便性狀等一般情況的變化，并進(jìn)行 DAI評(píng)分。治療結(jié)束后，各組大鼠禁食不禁水24小時(shí)，利多卡因麻醉，股動(dòng)脈取血，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)血清 IL-13含量，免疫組化法檢測(cè)腸粘膜組織中TLR4的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況觀察:整個(gè)治療期間CK組大鼠精神狀態(tài)良好，喜覓食，體毛光澤整潔，動(dòng)作敏捷，體重增加，糞便為正常的黑色顆粒狀。其余各組大鼠在造模成功后均出現(xiàn)不同程度的稀便

4、或粘液膿血便，且肛周污穢，扎堆嗜蜷臥，不喜活動(dòng)，精神差，被毛凌亂無(wú)光澤，進(jìn)食量減少。藥物干預(yù)后除MG組大鼠外，HD組、MD組、LD組、MS組四組大鼠精神狀態(tài)、食量、體重等一般情況逐漸改善，稀便及黏液膿血便較前減少。其中以HD組大鼠癥狀改善最明顯，MS組與MD組大鼠相比，好轉(zhuǎn)情況無(wú)明顯差別，LD組大鼠情況不及以上三組。而MG組大鼠隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)度狀態(tài)每況愈下，稀便或黏液膿血便加重，體重均有不同程度的減輕，精神萎靡，嗜蜷臥，被毛暗淡無(wú)光澤，不喜

5、食。
　　2.DAI評(píng)分結(jié)果:HD組、MD組、LD組、MS組均低于MG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HD組相較于MD組、LD組及MS組三組均低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組與MS組均低于LD組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組與 MS組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.結(jié)腸組織病理學(xué)觀察:CK組大鼠組織表面上皮完整，隱窩長(zhǎng)且平直，未見分支、扭曲，杯狀細(xì)胞數(shù)量多，固有膜內(nèi)偶見炎細(xì)胞，黏膜肌層未見增厚，黏膜下層未見血管擴(kuò)張充血和水腫；MG組可見潰瘍

6、表面被覆炎性滲出物及壞死組織，固有膜內(nèi)大量炎細(xì)胞彌漫浸潤(rùn)；HD組大鼠組織表面上皮完整，隱窩長(zhǎng)且平直，偶見分支，杯狀細(xì)胞數(shù)量較多，固有膜內(nèi)可見少量炎細(xì)胞；MD組、MS組差異不明顯，組織表面上皮不規(guī)則，隱窩分支少，杯狀細(xì)胞數(shù)量較多，固有膜內(nèi)可見較少炎細(xì)胞；LD組表面上皮不規(guī)則，隱窩呈分支狀并且扭曲，杯狀細(xì)胞數(shù)量明顯減少，隱窩基底部與黏膜肌層距離增加，其間可見大量炎細(xì)胞片狀浸潤(rùn)，黏膜肌層增厚。
　　4.指標(biāo)檢測(cè)。IL-13的表達(dá)：CK組

7、IL-13表達(dá)均高于HD組、MD組、LD組、MS組以及MG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HD組高于MD組、LD組、MS組及MG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組、MS組高于LD組、MG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LD組高于MG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組與MS組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TLR4的表達(dá)：CK組TLR4表達(dá)低于HD組、MD組、LD組、MS組以及MG組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HD組低于MD組、LD組、MS組及MG組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組、MS組低

8、于LD組、MG組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LD組低于MG組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MD組與MS組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：翁連解毒湯能夠顯著改善潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的一般情況和腸黏膜組織的損傷情況，中藥高劑量組效果優(yōu)于其它各治療組，中劑量組與美沙拉嗪組療效相當(dāng)，低劑量組療效次之。其作用機(jī)制可能是通過降低腸黏膜組織中TLR4的表達(dá)、上調(diào)IL-13的含量來(lái)實(shí)現(xiàn)的，通過影響某種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，增加抑炎因子的釋放，促使促炎因子和抑炎因子趨于動(dòng)態(tài)平