解毒消癰方藥對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠NF-κB、IL-1β、IL-8影響的研究.pdf

1、目的：潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種病因尚不十分明確的直腸和結(jié)腸慢性炎癥性疾病，臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、粘液膿血便等，病程遷延，反復(fù)發(fā)作，目前UC的治療仍是臨床上的一大難題。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為UC的發(fā)病機(jī)制是多因素作用于遺傳易感人群，使之免疫反應(yīng)亢進(jìn)，造成自身免疫、體液免疫、細(xì)胞免疫等多種免疫功能異常，以及各種細(xì)胞活化、多種炎性介質(zhì)分泌所產(chǎn)生的綜合效應(yīng)。隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的迅速發(fā)展，以及近年來(lái)對(duì)

2、細(xì)胞因子、核因子-кB（NF-кB）的研究，UC的發(fā)病機(jī)制正逐步得以揭示。TLRs/NF-кB通路的研究為尋找UC的治療提供了新的契機(jī)，通過(guò)抑制此通路的關(guān)鍵分子進(jìn)而阻斷UC過(guò)激的炎癥反應(yīng)已成為眾多學(xué)者研究的方向。西藥治療上主要以柳氮磺胺吡啶（SASP）及其衍生物和糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑為主，但這些方法只能暫時(shí)控制病情，且副作用多，所以尋求安全有效的治療方法就是當(dāng)務(wù)之急。UC屬于中醫(yī)的“泄瀉”、“久痢”、“血便”等范疇，中醫(yī)治療本病有著悠

3、久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)。
　　 解毒消癰方藥是李佃貴教授治療UC的經(jīng)驗(yàn)方，由黨參、白頭翁、黃連、白芍、秦皮、薏米、苦參、地榆、當(dāng)歸、甘草等組成，從多年的臨床經(jīng)驗(yàn)看，本方對(duì)UC具有可靠的療效。本課題組前期實(shí)驗(yàn)亦已證實(shí)，化濁解毒、健脾消癰的治療法則對(duì)UC大鼠模型具有較好的療效。本研究從TLRS/NF-кB通路的關(guān)鍵環(huán)節(jié)NF-кB以及下游細(xì)胞因子白介素-1β、白介素-8入手，進(jìn)一步探討解毒消癰方藥的治療潰瘍性結(jié)腸炎的機(jī)制。
　　

4、 方法：SD大鼠60只，雌性，隨機(jī)分為6組，每組10只。分別為正常組、模型組、柳氮磺胺吡啶組、解毒消癰方藥高、中、低劑量組。除正常組外，其余大鼠均以2，4，6-三硝基苯磺酸TNBS/乙醇復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型。
　　 造模后第3天模型組開(kāi)始每日以生理鹽水灌胃10ml/Kg，柳氮磺胺吡啶組（SASP）：先將片劑研細(xì)粉，過(guò)100目篩，用蒸餾水配成混懸液，按0.5g/kg體重（想當(dāng)于成人用藥量的10倍）給藥，每次2.5 ml灌胃給藥；解

5、毒消癰方藥低劑量組：將中藥水煎后濃縮成4.60g/kg灌胃，解毒消癰方藥中劑量組：將中藥水煎后濃縮成9.2g/kg灌胃，解毒消癰方藥中劑量組：將中藥水煎后濃縮成18.3g/kg灌胃正常對(duì)照組，每天予等量生理鹽水灌胃，10ml/Kg，連續(xù)10天。
　　 每日觀察大鼠的體重變化、大便性狀和隱血情況。第11天分別取各組大鼠結(jié)腸組織，觀察炎癥程度、病變深度、隱窩破壞程度與病變范圍，評(píng)價(jià)組織學(xué)損傷程度。放射免疫分析法測(cè)定UC大鼠血清IL-

6、1β、IL-8含量，免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)NF-кB含量，所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均SPSS13.0分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、一般情況：造模大鼠均懶動(dòng)，少食，毛色不光潔，嗜臥扎堆，拱背，反應(yīng)不靈敏，體重下降，大便次數(shù)增多，稀便，部分大鼠出現(xiàn)肉眼血便。
　　 2、各造模大鼠結(jié)腸組織均有不同程度損傷。大體觀察：各治療組和陽(yáng)性對(duì)照組效果均優(yōu)于模型組模型組潰瘍個(gè)數(shù)和潰瘍面積均較多，中高劑量治療組和陽(yáng)性藥治療組潰瘍個(gè)數(shù)和潰瘍面

7、積明顯減少，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。光鏡下模型組可見(jiàn)潰瘍，組織明顯水腫、充血及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性粒細(xì)胞為主。低劑量組也可見(jiàn)潰瘍，仍有較明顯的組織水腫和大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。中、高劑量組及柳氮磺胺吡啶（SASP）組潰瘍較少，并可見(jiàn)已愈合的潰瘍組織，組織水腫和充血明顯減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 3、NF-кB免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：空白對(duì)照組偶見(jiàn)NF-кB表達(dá)陽(yáng)性的

8、細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)淺黃色，且陽(yáng)性率較低，顯著低于模型組。模型組可見(jiàn)大量陽(yáng)性細(xì)胞，多數(shù)為棕黃色，陽(yáng)性率高。中藥高，中劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組的細(xì)胞質(zhì)多為淺黃色或黃色，陽(yáng)性率低。X2=123.620，p=0.000與模型組比較中藥的中，高劑量組P<0.003，有顯著性差異與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)明顯差別（P<0.003）。
　　 4、大鼠血清白介素1β含量：模型組（215.1±14.37 pg/ml）高于正常組（123.8±14.88pg/ml）以及解毒

9、消癰方藥高劑量組（134.6±12.08 pg/ml）、中劑量組（143.6±13.76pg/ml）、低劑量組（148.1±16.25pg/ml）和柳氮磺胺吡啶組（125.0±14.89pg/ml）。解毒消癰方藥各治療組與SASP組血清IL-1β的含量均低于模型組，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。解毒消癰方藥高劑量組與柳氮磺胺吡啶組無(wú)顯著差異（p>0.05），結(jié)果采用SPSS13.0分析。大鼠血清白介素8含量：模型組（486.7±12.8

10、5 pg/ml）高于正常組（250.3±9.74pg/ml）以及解毒消癰方藥高劑量組（308.8±8.94pg/ml）、中劑量組（342.0±11.57pg/ml）、低劑量組（380.7±9.59pg/ml）和柳氮磺胺吡啶組（299.9±11.99pg/ml）。解毒消癰方藥各治療組與SASP組血清IL-8的含量均低于模型組，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。解毒消癰方藥高劑量組與柳氮磺胺吡啶組無(wú)顯著差異（p>0.05），結(jié)果采用SPSS13