家蠶脂肪體變態(tài)發(fā)育的蛋白質(zhì)組研究及Hemolin與Yippee蛋白相互作用.pdf

1、家蠶（Bombyx mori）是一種重要的鱗翅目模式昆蟲，是研究變態(tài)發(fā)育的理想材料。脂肪體是體內(nèi)的一種重要組織器官，它既是代謝中心，又是激素作用的靶組織，在家蠶生長(zhǎng)發(fā)育和變態(tài)過程中發(fā)揮著極其重要的作用。我們進(jìn)行了家蠶脂肪體在變態(tài)發(fā)育過程中的蛋白質(zhì)組學(xué)研究，以期找到與變態(tài)發(fā)育密切相關(guān)的蛋白。另外昆蟲翅的發(fā)育是一個(gè)典型的變態(tài)過程，我們對(duì)在翅原基中表達(dá)的Hemolin蛋白和Yippee蛋白進(jìn)行了相互作用研究，為今后研究?jī)烧咴诎l(fā)育過程的作用提供

2、依據(jù)。本研究得到如下一些結(jié)果：
　　1.從家蠶五齡幼蟲期和蛹期不同發(fā)育階段提取脂肪體總蛋白，利用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離和鑒定，找出不同時(shí)期的27個(gè)差異蛋白點(diǎn)；對(duì)這些蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫檢索，檢索到相匹配的候選蛋白質(zhì)，這些蛋白與物質(zhì)和能量代謝、細(xì)胞骨架、蛋白質(zhì)代謝與合成、生長(zhǎng)發(fā)育、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生理活動(dòng)緊密相關(guān)，在家蠶生長(zhǎng)發(fā)育與變態(tài)發(fā)育的過程中可能發(fā)揮著重要的功能和作用。
　　2.從27個(gè)差異蛋白點(diǎn)中選取了9個(gè)蛋白相對(duì)應(yīng)的基因進(jìn)

3、行熒光定量分析，其中有70K熱休克蛋白、脯氨酰羥化酶、延伸因子、谷胱甘肽硫解轉(zhuǎn)移酶、琥珀酰輔酶 A、胰凝乳蛋白酶抑制劑、胞質(zhì)甲酰四氫葉酸脫氫酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶等等，并對(duì)它們?cè)谧儜B(tài)發(fā)育中的可能作用進(jìn)行了分析。
　　3.通過制備抗體來研究Hemolin蛋白與Yippee蛋白之間的相互作用。我們用新西蘭大白兔制備了家蠶Yippee蛋白的多克隆抗血清，Western Blotting結(jié)果顯示出我們制備的家蠶Yippee蛋白兔多

4、克隆抗血清具有較好的特異性。
　　4.利用本實(shí)驗(yàn)室之前制備的家蠶Hemolin鼠多克隆抗血清和Yippee蛋白兔多克隆抗血清對(duì)Hemolin和Yippee蛋白進(jìn)行了免疫共沉淀和雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明了Hemolin和Yippee蛋白在家蠶翅原基中有相互作用。
　　通過上述研究我們找到了一些與變態(tài)發(fā)育有關(guān)的重要蛋白，對(duì)變態(tài)發(fā)育的研究有著一定的參考價(jià)值。我們提出了一個(gè)關(guān)于Hemolin與Yippee蛋白的相互作用的一個(gè)假設(shè)，對(duì)揭示翅