黑麥草、剪股穎再生體系的建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)cry8C基因的導(dǎo)入.pdf

1、多年生黑麥草(LoliumperenneL.)、匍匐剪股穎(AgrostisstoloniferaL.)是國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的重要冷季型草坪草之一，利用植物基因工程技術(shù)改良其抗蟲性對(duì)防治地下害蟲的危害，減少殺蟲劑的使用，保護(hù)環(huán)境，節(jié)約草坪維護(hù)費(fèi)用具有重要的意義。本文對(duì)這兩種草坪草的組織培養(yǎng)與植株再生技術(shù)進(jìn)行了研究。對(duì)于農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)進(jìn)行了探索。經(jīng)PCR方法檢測(cè)，已獲得轉(zhuǎn)cry8C基因剪股穎。其主要研究內(nèi)容如下： (1)以多

2、年生黑麥草卡特、暢想種子為外植體，卡特在2,4-D濃度為9mg/L時(shí)，愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)到41.3％；暢想在2,4-D濃度為7mg/L時(shí)，愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)到33.3％；在7mg/L2,4-D時(shí)卡特胚性愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)到24.7％，暢想胚性愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)到18.7％。添加細(xì)胞分裂素TDZ對(duì)提高愈傷組織的誘導(dǎo)率有一定的作用，有助于改善愈傷組織狀態(tài)。以黑麥草胚軸為外植體，其愈傷誘導(dǎo)率低于成熟種子的誘導(dǎo)率。添加脯氨酸和水解酪蛋白可以提高胚性愈傷

3、誘導(dǎo)率。剪股穎南岸種子在6mg/L2,4-D和0.2mg/LTDZ培養(yǎng)基中誘導(dǎo)率最高達(dá)到68.1％，在5mg/L2,4-D、0.1mg/LTDZ時(shí)，胚性愈傷誘導(dǎo)率最高達(dá)到45.6％。 以繼代2個(gè)月的胚性愈傷組織進(jìn)行分化，在0.3mg/LTDZ、0.7mg/L6-BA時(shí)黑麥草卡特的愈傷分化率最高達(dá)到31.7％；在0.5mg/LTDZ、0.5mg/L6-BA時(shí)，暢想的分化率最高達(dá)到26％。剪股穎南岸在0.3mg/LTDZ、0.5mg

4、/L6-BA時(shí)，愈傷分化率最高達(dá)到52.7％。繼代5個(gè)月后，卡特的愈傷分化率降到20.3％，暢想的愈傷分化率降到12.3％，南岸的愈傷分化率降到41.2％，作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料，卡特和南岸的愈傷組織是比較合適的。 (2)分別將抗蟲基因cry8C置于Ubiquitin啟動(dòng)子和煙草根部特異啟動(dòng)子TobRB7的調(diào)控之下，構(gòu)建成p30U8C和p30T8C兩個(gè)可在植物中表達(dá)的載體，并將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404。通過農(nóng)桿菌的介導(dǎo)將U