多年生黑麥草再生體系的建立及農(nóng)桿菌介導(dǎo)AVP1基因的導(dǎo)入.pdf

1、多年生黑麥草(Lolium perenne L.)是國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的重要冷季型禾草之一。利用基因工程進(jìn)行遺傳改良的研究一直備受人們關(guān)注。本研究以多年生黑麥草(Lolium perenne L.)的三個(gè)品種：里加(Regal)、貝爾勒(Belle)、馬拉松(Marathon)為研究對(duì)象，建立了高效的遺傳轉(zhuǎn)化體系，研究結(jié)果表明： (1) 建立了多年生黑麥草的再生體系。以多年生黑麥草的芽尖、根尖、下胚軸、成熟種子為外植體進(jìn)行了愈傷組織

2、誘導(dǎo)和分化的研究，通過不同處理結(jié)果的比較表明，不同劃割處理的成熟種子的愈傷組織誘導(dǎo)率不同，不同外植體的愈傷組織誘導(dǎo)率也不同，芽尖、根尖愈傷組織的誘導(dǎo)效果較差，縱向劃割的成熟種子的愈傷組織的誘導(dǎo)率及分化能力均優(yōu)于下胚軸；2,4-D濃度在5-7 mg/L，6-BA濃度為0.05-0.1mg/L時(shí)有利于成熟種子和下胚軸誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織；在分化培養(yǎng)基中添加0.5-1.0mg/L6-BA對(duì)愈傷組織的分化效果較好；繼代培養(yǎng)時(shí)間對(duì)愈傷組織的分化率有很

3、大影響，成熟種子和下胚軸在繼代培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)60d和80d時(shí)分化率最高，繼代天數(shù)過長不利于愈傷組織的生長。 (2) 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的多年生黑麥草遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立與優(yōu)化。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象的觀察和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析表明，將預(yù)培養(yǎng)4d的黑麥草的胚性愈傷組織經(jīng)OD600=0.6左右的農(nóng)桿菌菌液在負(fù)壓下浸染6min，共培養(yǎng)3d，用250mg/L的羧芐青霉素(Carb)來脫菌，附加150μmol/L的乙酰丁香酮(AS)，然后轉(zhuǎn)接到含75mg/L的