多年生黑麥草再生體系的建立及農桿菌介導AVP1基因的導入.pdf

1、多年生黑麥草(Lolium perenne L.)是國內外廣泛應用的重要冷季型禾草之一。利用基因工程進行遺傳改良的研究一直備受人們關注。本研究以多年生黑麥草(Lolium perenne L.)的三個品種：里加(Regal)、貝爾勒(Belle)、馬拉松(Marathon)為研究對象，建立了高效的遺傳轉化體系，研究結果表明： (1) 建立了多年生黑麥草的再生體系。以多年生黑麥草的芽尖、根尖、下胚軸、成熟種子為外植體進行了愈傷組織

2、誘導和分化的研究，通過不同處理結果的比較表明，不同劃割處理的成熟種子的愈傷組織誘導率不同，不同外植體的愈傷組織誘導率也不同，芽尖、根尖愈傷組織的誘導效果較差，縱向劃割的成熟種子的愈傷組織的誘導率及分化能力均優(yōu)于下胚軸；2,4-D濃度在5-7 mg/L，6-BA濃度為0.05-0.1mg/L時有利于成熟種子和下胚軸誘導產生愈傷組織；在分化培養(yǎng)基中添加0.5-1.0mg/L6-BA對愈傷組織的分化效果較好；繼代培養(yǎng)時間對愈傷組織的分化率有很

3、大影響，成熟種子和下胚軸在繼代培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)60d和80d時分化率最高，繼代天數(shù)過長不利于愈傷組織的生長。 (2) 農桿菌介導的多年生黑麥草遺傳轉化體系的建立與優(yōu)化。通過對實驗現(xiàn)象的觀察和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析表明，將預培養(yǎng)4d的黑麥草的胚性愈傷組織經OD600=0.6左右的農桿菌菌液在負壓下浸染6min，共培養(yǎng)3d，用250mg/L的羧芐青霉素(Carb)來脫菌，附加150μmol/L的乙酰丁香酮(AS)，然后轉接到含75mg/L的