油菜高效再生體系的創(chuàng)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)法基因轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文油菜高效再生體系的創(chuàng)建及農(nóng)桿菌介導(dǎo)法基因轉(zhuǎn)化研究姓名：唐桂香申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物學(xué)指導(dǎo)教師：周偉軍20040101品種最高70o％(BA3m嘰、NAA01mg幾培養(yǎng)基)至N4、N6品種住BA4mg／L、NAA0ImgL培養(yǎng)基上沒(méi)有芽的再生?；蛐秃团囵B(yǎng)基與下胚軸外植體芽的再生呈顯著性差異，不同培養(yǎng)基、不同基因型是決定下胚軸外植體芽再生的主要因素。5甘藍(lán)型油菜不同類型外植體再生能力不同?；ㄐ蚬?、子葉、F胚軸利真

2、葉柄四種外植體，以子葉外植體芽再生頻率最高(567％)，花序梗再生能力最低(僅為100％)，其次為下胚軸(333％)和真葉柄(233％)；真葉柄具有最高的再生外植體數(shù)目(323)，其次為花序梗(300)和子葉(157)。利用無(wú)菌苗子葉作為外植體具有諸多優(yōu)點(diǎn)，外植體來(lái)源多且不受季節(jié)限制，另外也可減少外植體的污染程度。6通過(guò)對(duì)根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化多種因素的比較和探索，建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系。以甘藍(lán)型油菜Nl品種無(wú)菌苗完整子葉子葉柄外植體，預(yù)培

3、養(yǎng)2d，經(jīng)農(nóng)桿菌EHAl05(含有質(zhì)粒pDWl51)感染lo~15min共培養(yǎng)48h，在含卡那霉素(Kan)15mg，L抗性和羧芐青霉素(car)500mg，L培養(yǎng)基上篩選得到轉(zhuǎn)化體，在現(xiàn)有品種上轉(zhuǎn)化頻率為25％。轉(zhuǎn)化體經(jīng)PCR檢測(cè)外源基因已整合到甘藍(lán)型油菜基因組中，轉(zhuǎn)化植株的大田試驗(yàn)有待于進(jìn)一步研究。此外，用下胚軸外植體作為轉(zhuǎn)化受體時(shí)未篩選到轉(zhuǎn)化體。這與現(xiàn)有的研究報(bào)道不盡一致，也有待于進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：油菜：離體培養(yǎng)；子葉；下胚軸：