芽孢桿菌B1胞外活性物質(zhì)的分離鑒定及溶藻機(jī)制的研究.pdf

1、球形棕囊藻是我國(guó)珠江口海域典型的優(yōu)勢(shì)藻種之一,近年來(lái)爆發(fā)日益頻繁,對(duì)我國(guó)經(jīng)濟(jì)和海洋生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重的威脅。采用物理法和化學(xué)法治理赤潮,由于受到成本和二次污染等因素制約,經(jīng)濟(jì)、高效、環(huán)保的生物法治理赤潮尤其以菌控藻已成為赤潮治理領(lǐng)域的一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。
　　基于課題組已從珠海球形棕囊藻赤潮爆發(fā)的海域中分離篩選得到一株溶藻芽孢桿菌B1,本論文對(duì)B1菌的溶藻方式及溶藻效果,溶藻活性物質(zhì)的分離鑒定及溶藻機(jī)制進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下:

2、r>　　(1)B1菌是通過(guò)分泌胞外活性物質(zhì)的間接方式對(duì)球形棕囊藻、中肋骨條藻、東海原甲藻及赤潮異彎藻起溶藻作用,溶藻效果與B1無(wú)菌濾液的投加量成正相關(guān)。當(dāng)B1無(wú)菌濾液的投加量為4％(V無(wú)菌濾液/V藻液=1/25)時(shí),對(duì)四種赤潮藻的溶藻效果是:球形棕囊藻>中肋骨條藻>東海原甲藻>赤潮異彎藻,除藻率分別為:92.3%、91.8%、89.4%和84.4%。
　　(2)采用ODS-A柱層析法和HPLC對(duì)B1菌分泌的胞外活性物質(zhì)進(jìn)行分離純化

3、,最終得到四種對(duì)球形棕囊藻除藻率分別為46.9%、50.3%、55.0%和55.7%的活性物質(zhì)。對(duì)這四種活性物質(zhì)進(jìn)行Q-TOF-MS測(cè)定,采用PeakViewTM軟件分析 Q-TOF-MS測(cè)得的數(shù)據(jù),推斷出溶藻活性物質(zhì)分別為L(zhǎng)-組氨酸、o-酪氨酸、N-乙酰組胺和咪唑丙烯酸。
　　(3)B1菌分泌的胞外活性物質(zhì)經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex G-15柱層析和HPLC分離純化,得到了兩種除藻率為59.5%和54.6%的溶藻活性物質(zhì)。采

4、用Q-TOF-MS和PeakViewTM軟件對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)測(cè)定和分析,發(fā)現(xiàn)這兩種溶藻活性物質(zhì)為脯氨酰蛋氨酸和次黃嘌呤。
　　(4)對(duì)已鑒定出的L-組氨酸等六種溶藻活性物質(zhì)進(jìn)行了溶藻實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示L-組氨酸僅對(duì)球形棕囊藻有溶藻效果,而o-酪氨酸、N-乙酰組胺、咪唑丙烯酸、脯氨酰蛋氨酸和次黃嘌呤對(duì)球形棕囊藻、東海原甲藻、赤潮異彎藻和中肋骨條藻均有溶藻效果,說(shuō)明B1菌分泌的胞外活性物質(zhì)具有較好的廣譜殺藻性。
　　(5)溶藻機(jī)理研究表