類芽孢桿菌B28抗氧化物質paenibactin的分離提純、活性及結構鑒定.pdf

1、類芽孢桿菌是一類具有豐富代謝產(chǎn)物及部分商業(yè)化的細菌。為了從微生物中篩選新型、天然、安全的抗氧化劑，本研究用FRAP(Ferricreducingantioxidantpotential)總抗氧化能力試劑盒對類芽孢桿菌的發(fā)酵液進行檢測，發(fā)現(xiàn)一株類芽孢桿菌B28具有較顯著抗氧化活性。繼而對該菌株進行了16SrDNA測序，鑒定其為Paenibacillusehimensis。優(yōu)化確定了發(fā)酵培養(yǎng)基，對其所含目標抗氧化物用大孔樹脂吸附、C18固相

2、萃取柱萃取及HPLC分離等方法，從發(fā)酵液中提取純化獲得了目標抗氧化物純品。
　　 后用VC、VE類似物Trolox等作為參比物，以不同方法測試該化合物的體外抗氧化活性。用FRAP法測得該化合物的相對抗氧化能力為28.73，為Trolox的2.66倍;用DPPH法測得其體外自由基清除能力為VC的7.01倍;再經(jīng)DNA超螺旋破壞實驗，證實在防止DNA分子被過氧化氫氧化破壞的體外實驗中，其活性明顯高于VC;為了揭示該物質在不同環(huán)境條件

3、下的穩(wěn)定性，還就溫度和pH對該化合物抗氧化活性的影響進行了實驗，結果顯示，該物質對溫度和酸堿具有較強的耐受性，在不同pH下總抗氧化能力區(qū)別不大，僅在100℃下處理2h后才有較明顯的活性降低。這些數(shù)據(jù)說明其具有被開發(fā)為新型抗氧化劑的基礎。
　　 為了確認該物質是否為新型化合物，使用ESI-MS、氨基酸分析、核磁共振等手段對其分子結構進行了解析，發(fā)現(xiàn)該物質與在類芽孢桿菌PaenibacilluselgiiB69菌株中發(fā)現(xiàn)的鐵載體pa

4、enibactin具有相同的分子結構。其單體物質的一級結構為DHB-[L-Ala]-[L-Thr]，以三聚體作為主要的存在形式，盡管也會有少量的單體和二聚體存在，三聚體分子量為924Da，屬于兒茶酚型鐵載體。根據(jù)其分子結構，推測其抗氧化能力主要來自于DHB基團中的鄰苯二酚結構，與已被廣泛使用的植物抗氧化劑黃酮類非常相似，同時還具有螯合鐵離子的功能?？梢云谕谶M一步的研究之后，將其作為具有多元作用的新型高效天然抗氧化劑。
　　 本