堿蓬內(nèi)生真菌JP4-1的篩選、鑒定及促生活性研究.pdf

1、碩士學位論文論文作者：學科專業(yè)：指導(dǎo)教師：培養(yǎng)單位：培養(yǎng)類別：完成時間：沈陽師范大學學位評定委員會單位代碼：單位代碼：10166堿蓬內(nèi)生真菌堿蓬內(nèi)生真菌JP41的篩選的篩選、鑒定鑒定及促生促生活性研究活性研究于飛微生物學卜寧生命科學學院全日制2016年05月16日I堿蓬內(nèi)生真菌JP41的篩選、鑒定及促生活性研究摘要植物內(nèi)生真菌是指生活于健康植物組織和器官內(nèi)部，而不使植物患病的真菌。植物內(nèi)生真菌在宿主的代謝、發(fā)育和進化過程中發(fā)揮著重要作用

2、，其次生代謝產(chǎn)物具有多種生物學活性，如促進植物生長，增強其抗逆、抗病能力等，已成為發(fā)現(xiàn)新的活性先導(dǎo)化合物的重要來源。堿蓬（Suaedasalsa）是生長于高鹽堿土壤中的一種特殊植物，從這種植物體內(nèi)分離得到的內(nèi)生菌具有豐富的多樣性且多為可以生存于鹽堿特殊環(huán)境的極端微生物，這種極端微生物一般具有與其宿主所處的生長環(huán)境相適應(yīng)的特殊代謝機制，能產(chǎn)生獨特的活性代謝產(chǎn)物，并對宿主產(chǎn)生一定的影響。研究堿蓬內(nèi)生真菌、分析其促生活性代謝產(chǎn)物，追蹤內(nèi)生真菌

3、的定殖特性，對于開發(fā)和利用堿蓬內(nèi)生真菌資源，探索內(nèi)生真菌與宿主植物間的互作機制具有重要意義和潛在的應(yīng)用價值。本研究通過水培法對已分離得到的5株堿蓬內(nèi)生真菌進行篩選，以其中對水稻幼苗最具促生活性的JP41為實驗菌株，采用形態(tài)學鑒定和分子生物學鑒定相結(jié)合的方法對該菌株進行鑒定；通過單因素實驗和正交實驗確定其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；運用過濾離心、超聲破碎、萃取、旋蒸等技術(shù)手段研究該菌株發(fā)酵液對水稻幼苗的促生長活性成分。采用PEGCaCl2介

4、導(dǎo)的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法對JP41菌株進行綠色熒光蛋白（GFP）標記和定殖特性的初步研究，主要研究結(jié)果如下：1.水培試驗證明：實驗選取的5株堿蓬內(nèi)生真菌對水稻幼苗均具有一定的促生作用，其中菌株JP41促生效果最為明顯。2.根據(jù)對菌株JP41的形態(tài)學觀察和分子生物學鑒定，可將其歸屬為小叢殼屬（Glomerellasp.）。3.單因素試驗和正交試驗表明，菌株JP41的最佳發(fā)酵條件是：以土豆液體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，蔗糖4%，硫酸銨0.15%，氯化鉀0.0

5、2%，磷酸氫二鉀0.2%，pH5.0，培養(yǎng)溫度25℃，裝液量為50%，125rpm發(fā)酵120h。4.運用過濾離心、超聲破碎、萃取、旋蒸等技術(shù)手段和水培法探究JP41菌株發(fā)酵液對水稻幼苗的促生長活性成分的結(jié)果表明，以正丁醇提取的該菌株胞外小分子萃取物可使水稻幼苗的株高和干重分別提高10.84%和14.67%，葉綠素總量提高44.22%，促生長作用最為顯著。JP41菌株發(fā)酵液的正丁醇萃取成分的液相色譜分析表明其中含有赤霉素（GA）、生長素（