饑餓誘導渦蟲差異表達基因的篩選及九產(chǎn)地淡水渦蟲Hsp70親緣關(guān)系分析.pdf

1、目的：采用mRNA差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應技術(shù)(DDRT-PCR)篩選塔崗水庫淡水渦蟲饑餓誘導中的差異表達序列標簽(Express sequence tags，ESTs)，探索淡水渦蟲抗饑餓生存的分子機理；對九產(chǎn)地淡水渦蟲的Hsp70序列進行分子系統(tǒng)學研究，對其系統(tǒng)演化關(guān)系進行了初步探討。 方法：饑餓誘導塔崗水庫的淡水渦蟲，在饑餓一個月時將其處死，提取總RNA，用mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)研究饑餓情況下差異表達

2、的基因，克隆與測序后用生物信息學方法對測序結(jié)果進行分析；克隆九產(chǎn)地淡水渦蟲Hsp70基因序列，進行分子系統(tǒng)學分析。 結(jié)果：運用mRNA差別顯示技術(shù)篩選饑餓渦蟲體內(nèi)的差別表達基因，獲得18條差異表達片段。6個為18srRNA，2個為28srRNA，1個為翻譯起始因子，1個為與日本三角渦蟲信使mRNA上與DjClg3表達有關(guān)的CaspaSe-3基因，1個與日本三角渦蟲DEAD box蛋白表達有關(guān)的信使mRNA同源序列，1個與Hsp7

3、0基因同源，1個與Hsp90基因同源，2個與Polaromonas藻JS666的基因組序列同源性最高，1個與Schmidtea mediterranea克隆H.67.8d的未知mRNA序列同源性最高，還有2個在Genbank中未找到同源序列。此外，我們還克隆了九個產(chǎn)地渦蟲的Hsp70部分cDNA序列，并用分子進化分析軟件Meg3.1軟件對其分析構(gòu)樹。九產(chǎn)地渦蟲Hsp70親緣關(guān)系顯示：信陽新縣農(nóng)科所、信陽寨溝和信陽息縣陳灣大橋下三地聚類一

4、枝，親緣關(guān)系較近；南陽淮源寺和南陽桐柏均屬桐柏山區(qū)，聚為一個小枝；山西王莽嶺西部河錫崖村和山西王莽嶺錫崖溝下兩個產(chǎn)地同在王莽嶺風景區(qū)內(nèi)，地理位置及環(huán)境都非常相似，聚為一個小枝：新鄉(xiāng)衛(wèi)輝塔崗水庫屬太行山區(qū)，但與王莽嶺兩地距離關(guān)系而言，相對較遠，因此獨立為一枝；洛陽白云山屬伏牛山系，地理位置上與前八個產(chǎn)地相對比較遠，親緣關(guān)系較遠，故也單獨為一枝。 結(jié)論：初步篩選出18個饑餓誘導的差異表達ESTs，為功能基因的克隆與分析奠定了基礎(chǔ)。九