TPO受體激動(dòng)劑治療原發(fā)免疫性血小板減少癥的相關(guān)研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩130頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分TPO受體激動(dòng)劑治療原發(fā)免疫性血小板減少癥患者后細(xì)胞因子的改變
  研究背景:
  原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia,ITP)是以體液免疫和細(xì)胞免疫介導(dǎo)的血小板過度破壞和巨核細(xì)胞成熟障礙為主要特征的獲得性免疫性出血性疾病。近年來,越來越多的研究已經(jīng)證實(shí)T細(xì)胞異常在ITP的發(fā)病中起著重要的作用,其中輔助性T細(xì)胞不僅在抗血小板抗體產(chǎn)生過程中起作用而且能促進(jìn)ITP患者抗

2、血小板T細(xì)胞的活性。ITP患者會(huì)表現(xiàn)出Th1和Th17細(xì)胞增強(qiáng)而Th2細(xì)胞減低并伴有CD4+CD25+Foxp3+的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞受損的極化趨勢(shì)。并且有研究報(bào)道ITP患者體內(nèi)細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的血小板破壞是增強(qiáng)的。但是具體的作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。
  促血小板生成素作為最重要的刺激血小板生成的細(xì)胞因子,在ITP患者中表現(xiàn)出含量的相對(duì)不足,因此一系列TPO受體激動(dòng)劑在ITP治療中得到了很好的發(fā)展。其中艾曲泊帕和羅米司亭已經(jīng)被美國(guó)食品

3、藥品管理局列入了ITP治療的常規(guī)二線用藥,而在我國(guó)重組人促血小板生成素(rhTPO)也已經(jīng)作為激素抵抗和復(fù)發(fā)ITP患者的推薦用藥得到了廣泛的應(yīng)用。TPO-RAs用藥后往往能很快見效,但是一旦停藥血小板又常常會(huì)降回到用藥前水平,因此其單藥治療常常難以獲得長(zhǎng)期的不依賴藥物的緩解。
  在各種自身免疫性疾病中細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫都發(fā)揮著重要的作用。研究發(fā)現(xiàn),ITP患者的免疫失衡與其細(xì)胞因子譜的異常息息相關(guān)。而大劑量地塞米松、脾切除、美羅華

4、等治療手段都被發(fā)現(xiàn)在疾病緩解的同時(shí)伴有細(xì)胞因子異常的糾正。盡管TPO-RAs用于ITP臨床治療已經(jīng)數(shù)年,但是對(duì)其治療過程中是否伴有細(xì)胞因子改變?nèi)匀徊磺宄?br>  研究目的:
  1.驗(yàn)證TPO-RAs治療激素耐受/復(fù)發(fā)型ITP的療效和副作用
  2.評(píng)價(jià)TPO-RAs對(duì)ITP患者細(xì)胞因子改變的影響,從而探尋其起效和作用機(jī)制
  研究方法:
  1.選取26例慢性激素抵抗/復(fù)發(fā)型ITP患者,均為單藥口服艾曲泊帕

5、或者皮下注射重組人血小板生成素(沈陽(yáng)三生,特比奧)治療。其中艾曲泊帕為25mg每天一次,可根據(jù)血小板計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)用藥劑量到50或75mg每天以維持血小板計(jì)數(shù)在≥50×109/L。特比奧則為每天皮下注射300U/Kg體重,可調(diào)節(jié)為隔天一次以保證血小板計(jì)數(shù)不超過100×109/L。用藥前檢測(cè)血常規(guī)及肝腎功。用藥過程中每周監(jiān)測(cè)血常規(guī)。另外選取15位健康志愿者作為對(duì)照組。
  2.治療六周后再次檢測(cè)血常規(guī)和肝腎功。根據(jù)患者血小板計(jì)數(shù)來分析療效

6、。根據(jù)血小板計(jì)數(shù)和有無出血將患者分為完全有效組,有效組和無效組。
  3.取ITP患者治療前和治療后血清,并抽取健康志愿者血清。用ELISA法分別檢測(cè)血清中IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-17A和TGF-β1含量,對(duì)治療前患者與健康志愿者,患者治療前后,以及有效組和無效組患者治療前后的細(xì)胞因子進(jìn)行對(duì)比。
  4.取患者治療前后以及健康志愿者的外周血,提取RNA,用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)IL-2,IFN-γ,IL-4,I

7、L-17A,TGF-β1以及RORγt的mRNA水平,分別對(duì)治療前患者與健康志愿者,患者治療前后,以及有效組和無效組患者治療前后的這些細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)比。
  研究結(jié)果:
  1.本次實(shí)驗(yàn)中26位患者TPO-RAs治療有效的有19位(有效率為73.08%),其中CR的有7位(占26.92%),治療無效的有7位為(占26.92%)。艾曲泊帕治療前兩周有兩位患者因血小板計(jì)數(shù)小于10×109/L而接受了血小板輸注。全

8、部患者在治療過程中均耐受良好。3位患者(2位是艾曲泊帕治療一位是特比奧治療)出現(xiàn)了一過性肝酶升高,但在保肝治療后恢復(fù)正常。4位出現(xiàn)頭疼,2位出現(xiàn)疲勞,2位出現(xiàn)惡心和腹瀉。
  2.ITP患者治療前血漿中IL-2和IFN-γ水平明顯高于健康對(duì)照者,而IL-4和TGF-β1則明顯低于健康對(duì)照者,兩者之間IL-17水平無明顯差異。TPO-RAs治療后患者的IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-17A水平并沒有發(fā)生明顯的改變。但TGF-β

9、1水平卻明顯升高(P=0.008)。治療后TGF-β1水平與健康對(duì)照組無明顯差異。
  3.治療前ITP患者IL-2,IFN-γ,IL-17A以及RORγt的mRNA水平明顯高于健康對(duì)照者,而IL-4和TGF-β1的mRNA水平則明顯低于健康對(duì)照者。同樣治療前后患者IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-17A以及RORγt的mRNA水平都沒有明顯改變。而TGF-β1的mRNA水平明顯升高(P=0.039),與健康對(duì)照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異

10、。
  4.治療有效組和無效組IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-17A的水平和mRNA水平與治療前相比均無明顯改變。同樣,RORγt的mRNA水平在有效組和無效組治療前后也是沒有明顯改變。但治療有效組TGF-β1不管血清水平還是其mRNA水平均比治療前明顯升高(P<0.05),而治療無效組TGF-β1則無明顯變化。
  研究結(jié)論:
  TPO-RAs能有效促進(jìn)激素抵抗或復(fù)發(fā)的ITP患者血小板升高,并且副作用輕微,患

11、者耐受良好。但是單一TPO-RAs治療不能糾正患者細(xì)胞因子的改變,不能改善ITP患者向Th1型細(xì)胞因子偏移的免疫失衡狀況。僅能使TGF-β1水平升高。這對(duì)于知道臨床上TPO-RAs聯(lián)合用藥提供了一定的理論依據(jù)。
  第二部分rhTPO治療妊娠合并原發(fā)免疫性血小板減少癥動(dòng)物模型的研究
  研究背景:
  妊娠期血小板減少是指妊娠期血小板計(jì)數(shù)小于150×109/L,在妊娠期婦女中常見。其發(fā)生原因有很多,其中由ITP引起的妊

12、娠期血小板減少,約占妊娠期血小板減少的4.1%。ITP在孕婦中發(fā)病率為1/1000-1/10000,由于母體的IgG型抗血小板抗體可通過胎盤到達(dá)胎兒循環(huán),妊娠合并ITP患者除了母體會(huì)有ITP常見臨床癥狀外,也會(huì)導(dǎo)致胎兒血小板減少及出血,隨著妊娠后期血小板漸進(jìn)性的減低,妊娠合并ITP患者圍產(chǎn)期死亡率和早產(chǎn)發(fā)生率均明顯升高。
  妊娠合并ITP的治療是很復(fù)雜的,要達(dá)到最佳效果需要產(chǎn)科、血液科及新生兒科醫(yī)師協(xié)作完成,其用藥治療選擇可參照

13、非妊娠ITP患者。每一種治療選擇均需考慮其對(duì)母親和胎兒的有效性及安全性,并選擇對(duì)母嬰損害最小的治療手段。目前對(duì)妊娠合并ITP患者的一線治療主要包括糖皮質(zhì)激素和靜脈丙種球蛋白(IVIG)等,對(duì)于一線治療無效或者副作用不能耐受的妊娠合并ITP患者,可選擇的治療手段非常有限。國(guó)內(nèi)一系列研究已證實(shí)重組人促血小板生成素(rhTPO)治療慢性ITP有很好的療效和較好的安全性。也已有報(bào)道rhTPO用于妊娠合并ITP治療效果顯著且對(duì)母體和胎兒無明顯毒副

14、作用,但是對(duì)rhTPO治療妊娠合并ITP的療效和安全性仍需要可靠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)支持。
  研究目的:
  1.建立妊娠合并ITP小鼠模型
  2.利用小鼠模型研究rhTPO對(duì)于妊娠合并ITP治療的療效和安全性
  3.利用妊娠合并ITP小鼠模型進(jìn)一步驗(yàn)證rhTPO治療對(duì)Treg和血清TGF-β1水平的影響。
  研究方法:
  1.建立妊娠合并ITP小鼠模型:C57適齡雌鼠與適齡雄鼠2:1合籠,每日晨8時(shí)

15、觀察陰栓或行陰道涂片,觀察到陰栓或陰道涂片見精子者定義為孕0天,于孕0天給予孕鼠腹腔注射抗血小板抗體,首次注射5mg/只,每48小時(shí)補(bǔ)注射一次5mg/只,定期測(cè)定血小板水平,并根據(jù)血小板計(jì)數(shù)水平適當(dāng)增加抗體劑量。以建立被動(dòng)型妊娠合并ITP小鼠模型。
  2.妊娠合并ITP小鼠隨機(jī)分為4組,于孕0天采血測(cè)定初始血小板水平。后注射抗血小板抗體,于孕1天起分別每天皮下注射0.9%生理鹽水,150U/Kg體重rhTPO,1500U/Kg體

16、重rhTPO,15000U/Kg體重rhTPO各100ul,連續(xù)注射14天,每日觀察母鼠情況,直至妊娠終止。于孕1,3,7,10,14天及妊娠終止時(shí)取血測(cè)定血常規(guī)。,于妊娠終止時(shí)留取血清測(cè)定血清生化六項(xiàng),于妊娠終止隨機(jī)取每組一半母鼠處死,留取骨髓,行骨髓涂片和網(wǎng)狀纖維染色。并取每組所生小鼠隨機(jī)選取16只測(cè)定出生小鼠血常規(guī)。剩余每組一半孕鼠仍與新生小鼠同籠觀察小鼠成活情況至少3周。
  3.與妊娠終止隨機(jī)所取每組15只母鼠處死后,血

17、清利用ELISA法測(cè)定TGF-β1水平,分離外周血和脾臟,利用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定每組母鼠Treg情況。
  研究結(jié)果:
  1.妊娠合并ITP小鼠模型血小板變化情況:注射抗血小板抗體后第一天,孕鼠血小板即降低到最低水平,隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),孕鼠血小板會(huì)逐漸升高,到造模第10天,血小板水平仍顯著低于對(duì)照組孕鼠。可認(rèn)為妊娠合并ITP小鼠模型可用。
  2.四組小鼠一般情況,食欲,精神狀況等在給藥期間和停藥期間均無明顯變化。局部注

18、射部位未見紅腫,實(shí)驗(yàn)期間8只孕鼠發(fā)生難產(chǎn)(3只NS組,2只低劑量組,1只中劑量組,2只高劑量組),有六只難產(chǎn)因發(fā)現(xiàn)及時(shí)未出現(xiàn)死亡。剩下兩只難產(chǎn)死亡,解剖后未見明顯內(nèi)臟出血情況,難產(chǎn)的發(fā)生與用藥之間無明顯相關(guān)性。
  3.用藥組與生理鹽水組相比,小鼠血小板計(jì)數(shù)明顯升高,血小板增多程度隨rhTPO濃度增加而有所增加,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  4.用藥組與生理鹽水組相比,血清生化檢測(cè)及骨髓纖維化未見明顯異常,胎鼠產(chǎn)出率及小鼠存活率均無

19、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。出生后觀察三周,四組均為發(fā)現(xiàn)子代小鼠成長(zhǎng)異常。
  5.用藥組與生理鹽水組相比,血清TGF-β1水平明顯升高,脾細(xì)胞中Treg比例明顯增加,但外周血中Treg未檢測(cè)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  研究結(jié)論:
  妊娠合并ITP小鼠被動(dòng)模型可在一定程度上模擬人抗血小板抗體介導(dǎo)的ITP,被動(dòng)模型小鼠血小板降低未影響其分娩過程。rhTPO治療抗血小板抗體引起的妊娠合并ITP小鼠療效顯著,可較快使血小板數(shù)量增加,模擬臨床劑量連

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論