煙草細(xì)胞周期相關(guān)基因NtCDC48的克隆與功能研究.pdf

1、CDC48是真核生物AAA(ATPaseassociatedwithavarietyofcellularactivities)蛋白家族的一個(gè)重要成員，進(jìn)化上相當(dāng)保守，能與許多不同的調(diào)控因子和效應(yīng)器分子相互作用，形成各種蛋白復(fù)合體參與調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)多種重要的生理活動(dòng)，如參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程一系列重要的生理活動(dòng)，如有絲分裂，紡錘體的去組裝，同類膜系統(tǒng)的融合等。 本研究利用裂殖酵母系統(tǒng)從煙草BY-2懸浮細(xì)胞中分離得到NtCDC48cDN

2、A，全長(zhǎng)2729bp，可讀框編碼808個(gè)氨基酸，推導(dǎo)蛋白含有2個(gè)典型的ATPase模塊(aa：245-374;518-646)，與擬南芥AtCDC48具有非常高的同源性。 在煙草懸浮細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)NtCDC48能顯著提高煙草BY-2細(xì)胞的有絲分裂指數(shù)，并導(dǎo)致紡錘體微管列陣的兩極結(jié)構(gòu)由相對(duì)集中轉(zhuǎn)換為極端彌散狀態(tài)。NtCDC48-GFP融和蛋白在細(xì)胞周期M期的亞細(xì)胞定位結(jié)果表明NtCDC48隨細(xì)胞周期進(jìn)程發(fā)生有規(guī)律的變化：前期，N

3、tCDC48-GFP在核區(qū)及細(xì)胞質(zhì)均有分布；中期在遠(yuǎn)離赤道板的細(xì)胞質(zhì)中呈點(diǎn)狀分布；而末期，細(xì)胞分裂即將結(jié)束時(shí)，NtCDC48-GFP在細(xì)胞板兩側(cè)更加集中，該位置正好是成膜體微管列陣存在的區(qū)域，而成膜體微管列陣由紡錘體微管去組裝后形成，這一結(jié)果暗示植物NtCDC48可能參與了紡錘體去組裝過(guò)程。 以NtCDC48全長(zhǎng)序列為探針對(duì)同步化后的BY-2細(xì)胞進(jìn)行Northern雜交，結(jié)果顯示NtCDC48在細(xì)胞周期整個(gè)進(jìn)程中均有表達(dá)，這暗