DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞周期阻滯相關(guān)基因的表達(dá)研究.pdf

1、目的：二烯丙基二硫(DADS) 可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞周期阻滯而起到抑制增殖的作用，但具體作用機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)旨在研究DADS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞MGC803細(xì)胞周期阻滯的相關(guān)基因表達(dá)，探討其分子機(jī)制。 方法：MTT比色實(shí)驗(yàn)分析DADS 對(duì)MGC803細(xì)胞增殖抑制作用，HE染色觀察IC50值濃度的DADS對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌 MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響，流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度和作用時(shí)間DADS對(duì)MGC803細(xì)胞的周期分布；通過Supe

2、rArray人細(xì)胞周期基因芯片檢測(cè)DADS作用于MGC803細(xì)胞后周期相關(guān)基因的表達(dá)譜；RT-PCR和western-blot驗(yàn)證與篩選關(guān)鍵性基因。 結(jié)果：MTT 比色法檢測(cè)顯示：DADS能顯著抑制人胃癌MGC803細(xì)胞增殖，呈濃度和時(shí)間依賴性。20、30、40、50mg·L-1DADS處理24h后，對(duì)癌細(xì)胞增殖的抑制率分別為18.38％、30.67％、38.87％ 、43.05％ ，處理48h抑制率分別為29.58％、40.1

3、3％、45.29％、 53.57％，處理72h抑制率分別為34.84％、48.66％、62.38％、68.07％，與對(duì)照組比較，差異有顯著性意義。 HE染色結(jié)果顯示：30mg·L-1DADS處理12h后，與對(duì)照組相比較，部分MGC803細(xì)胞變圓，浮起于培養(yǎng)基中，胞漿豐富，細(xì)胞核變小，染色變淡，細(xì)胞體積增大，核仁數(shù)目明顯減少，散在分布生長。 流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果提示：DADS呈濃度依賴性的阻滯MGC803細(xì)胞在G2/M期，與

4、對(duì)照組比較，差異有顯著性意義。30mg·L-1DADS作用MGC803細(xì)胞12小時(shí)，G2/M期百分率達(dá)26.4％，比對(duì)照組(6.9％)升高了3倍多。 基因芯片結(jié)果顯示：30mg·L-1DADS作用MGC803細(xì)胞4h后與對(duì)照組比表達(dá)上調(diào)2倍以上的基因有：CDC45L、CDK5R1(p35) 、CDKN1A(p21) 、CUL4A、GADD45α、RAD17、TP53；表達(dá)下調(diào)2倍以上的基因有：ANAPC5、 ATR、BRCA1、

5、CCNA2、CCNB2、CCNE1、CCNE2、CDC16、CDC6、CDK5RAP1、GTF2H1、MCM5、RAD9A、RGC32。該21個(gè)差異基因與DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞G2/M周期阻滯密切相關(guān)，其中與G2/M周期相關(guān)的基因包括：CDK5R1、TP53、p21、GADD45α、ANAPC5、ATR、BRCA1、CCNCA2、CCNB2、CDC6、CDC16、GTF2H1、RGC32等。 RT-PCR結(jié)果顯示：3

6、0mg·L-1DADS 處理MGC803細(xì)胞4h、8h、12h后，與對(duì)照組比較，TP53、GADD45α、p21mRNA表達(dá)增強(qiáng)，CyclinB1mRNA表達(dá)降低。 Western blot結(jié)果表明：30mg·L-1DADS作用MGC803細(xì)胞6h、12h、24h后，p53、GADD45α、p21蛋白表達(dá)上調(diào)，CyclinB1蛋白表達(dá)下調(diào)。 結(jié)論： 1.DADS可抑制人胃癌MGC803細(xì)胞生長，并與細(xì)胞G2/M期

7、阻滯有關(guān)。 2.DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞G2/M周期阻滯，可能是多個(gè)基因和多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路共同作用的結(jié)果。這些基因中也有G1期基因（CyclinE1和CyclinE2）的改變，說明DADS對(duì)整個(gè)細(xì)胞周期都有一定的影響。 3.DADS對(duì)MGC803細(xì)胞G2/M周期阻滯的分子機(jī)制可能與TP53、GADD45α、p21基因表達(dá)增強(qiáng)，CyclinB1基因表達(dá)降低有關(guān)；同時(shí)引起p53、GADD45α、p21蛋白表達(dá)上調(diào)，