高等植物中miRNA相關(guān)基因研究.pdf

1、miRNA是存在于高等生物中的一類長(zhǎng)度約為21nt的小分子RNA。miRNA基因是由基因組編碼的，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是具有莖環(huán)二級(jí)結(jié)構(gòu)的miRNA前體：pri-miRNA，pri-miRNA經(jīng)過(guò)一系列的加工成為成熟的miRNA分子。在植物miRNA產(chǎn)生過(guò)程中，RNaseⅢ類型的酶Dicer-like起著重要的作用。miRNA分子最終組裝入RNA介導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中，并且指導(dǎo)該復(fù)合體對(duì)靶基因的mRNA進(jìn)行切割或抑制其翻譯，以調(diào)節(jié)靶基因的

2、表達(dá)，從而調(diào)節(jié)植物體的生長(zhǎng)發(fā)育。 水稻OsDCL1蛋白負(fù)責(zé)水稻miRNA的加工與成熟，對(duì)水稻的正常生長(zhǎng)發(fā)育起著重要的調(diào)控作用。為了研究水稻miRNA代謝的機(jī)理，我們首先篩選了與OsDCL1相互作用的蛋白。我們以O(shè)sDCL1蛋白的PAZ結(jié)構(gòu)域作為誘餌，對(duì)水稻cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選，找到了若干個(gè)候選蛋白，并對(duì)其中的一個(gè)蛋白OsNOT2進(jìn)行了互補(bǔ)驗(yàn)證。 在擬南芥和水稻中，Argonaute(AGO)蛋白由一個(gè)大的基因家族編碼。A

3、GO蛋白都具有PAZ和Piwi兩個(gè)保守的結(jié)構(gòu)域，AGO是RISC的核心組分，在miRNA功能途徑中發(fā)揮著重要的作用。我們對(duì)擬南芥和水稻中的AGO基因家族成員進(jìn)行了進(jìn)化分析，確定了不同成員之間的同源關(guān)系。為了研究每個(gè)AGO蛋白在小分子RNA代謝和調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)發(fā)育中的作用，我們希望鑒定在每個(gè)通路中包含的蛋白。作為第一步，我們克隆了擬南芥AtAGO7和AtAGO10基因的全長(zhǎng)cDNA，并且在大腸桿菌系統(tǒng)中表達(dá)并純化了AtAGO1蛋白的N端來(lái)用