植物miRNA-168a跨界調(diào)控人基因表達(dá)再分析.pdf

1、學(xué)校代碼：10385分類號(hào)：研究生學(xué)號(hào)：1300403007密級(jí)：植物植物miRNAmiRNA168a168a跨界調(diào)控人基因表達(dá)再分析跨界調(diào)控人基因表達(dá)再分析AstepfurtheranalysisofcrosskingdomregulationofmiRNA168ainhumancells作者姓名：潘峰潘峰指導(dǎo)教師：許瑞安許瑞安合作教師：PhilippKapranovPhilippKapranov學(xué)科：生物學(xué)（生物化學(xué)與分子生物學(xué)）生

2、物學(xué)（生物化學(xué)與分子生物學(xué)）研究方向：MicrNAMicrNA跨界調(diào)控跨界調(diào)控所在學(xué)院：生物生物醫(yī)學(xué)學(xué)院醫(yī)學(xué)學(xué)院論文提交日期：二零二零一六年一六年三月二十二十日摘要I摘要植物micrNAs(miRNAs)跨界調(diào)控人基因表達(dá)現(xiàn)象首次發(fā)現(xiàn)于2011年，植物源性食物中的miRNA168a可經(jīng)腸胃道進(jìn)入血液循環(huán)到達(dá)肌體各個(gè)組織，在哺乳動(dòng)物肝細(xì)胞中靶向抑制低密度脂蛋白銜接蛋白受體1(LDLRAP1)的翻譯表達(dá)，從而影響血脂代謝。然而，目前食物中植

3、物源性的miRNAs存在的跨界調(diào)控人基因表達(dá)現(xiàn)象只發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)靶點(diǎn)，也只研究了與之對應(yīng)的兩個(gè)植物miRNA。miRNAs跨界調(diào)控靶點(diǎn)預(yù)測研究的滯后性以及有限的參考文獻(xiàn)是這一研究領(lǐng)域發(fā)展緩慢的重要原因。本研究在概括了miRNA跨物種調(diào)控的內(nèi)容與機(jī)制的基礎(chǔ)上系統(tǒng)性分析了現(xiàn)有miRNA靶點(diǎn)預(yù)測的計(jì)算機(jī)學(xué)習(xí)原則，針對植物miRNA跨界調(diào)控人基因表達(dá)靶點(diǎn)預(yù)測方面的功能與分析限制，本研究歸納了從NCBI現(xiàn)有數(shù)據(jù)中挖掘miRNA168a跨界調(diào)控靶點(diǎn)的研

4、究方法，在南京大學(xué)張辰宇教授課題組miRNA168a靶點(diǎn)預(yù)測的基礎(chǔ)上新增了近18個(gè)非重復(fù)性靶點(diǎn)，為后續(xù)研究miRNA跨界調(diào)控的科研工作者提供有用借鑒。進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)miR168a在人體細(xì)胞內(nèi)具有潛在調(diào)控靶點(diǎn)，慢型骨骼肌肌球蛋白結(jié)合蛋白C(MYPBC1)，該基因表達(dá)的MYBPC1接頭蛋白在運(yùn)動(dòng)能量提供中具有重要作用，我們設(shè)計(jì)了鑲有miRNA168a與MYBPC1的mRNA結(jié)合位點(diǎn)的綠色熒光報(bào)告基因以及對照實(shí)驗(yàn)，重組熒光質(zhì)粒與miRN

5、A168a雙轉(zhuǎn)染DU145細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組綠色熒光強(qiáng)度確實(shí)有降低，且后續(xù)A549細(xì)胞中的MYBPC1蛋白免疫印記實(shí)驗(yàn)也證明了miRNA168a對MYPBC1具有下調(diào)作用，因此，本研究初步確定了miRNA168a對MYBPC1具特異性的有負(fù)調(diào)控作用；最后，通過CCK8試劑檢測轉(zhuǎn)染miR168a后對癌細(xì)胞SHSY5Y和22RV1增殖的影響，研究發(fā)現(xiàn)處理后的細(xì)胞活性具有一定的變化規(guī)律，然而，其內(nèi)在調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。關(guān)鍵詞：miRNA1