THP-1細(xì)胞中miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16膿毒癥相關(guān)靶基因驗(yàn)證.pdf

1、目的:膿毒癥(Sepsis)是感染導(dǎo)致的全身炎癥反應(yīng)綜合征，病情發(fā)展快、預(yù)后差、病死率高，是臨床面對(duì)的重要問(wèn)題和研究熱點(diǎn)。通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)分析發(fā)現(xiàn):FOXO1和ACVR2A可能是在膿毒癥患者生存組和死亡組差異表達(dá)的miRNA-223、miRNA-15a和miRNA-16的靶基因。本課題選擇THP-1細(xì)胞系驗(yàn)證上述推論，為后續(xù)信號(hào)通路研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　(1)用LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞后，采用qRT-PCR檢測(cè)各

2、時(shí)間點(diǎn)(0h、12h、24h、48h、72h)三種miRNAs和(0h、24h、48h、72h)兩種靶基因mRNAs表達(dá)水平變化情況;
　　(2)將miRNAs模擬物、抑制物轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞48h后，采用qRT-PCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組相應(yīng)miRNAs含量變化情況;
　　(3)采用qRT-PCR和WesternBlot分別檢測(cè)miRNAs模擬物、抑制物轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞48h后FOXO1和ACVR2A的mRNAs和蛋白表達(dá)變化情

3、況。
　　結(jié)果:
　　(1) LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞后，miRNA-223/15a/16表達(dá)量均逐漸減少，在24h-48h達(dá)到最低點(diǎn)，72h時(shí)恢復(fù)至接近0h水平，三種miRNAs在12h、24h、48h的表達(dá)量與各自0h的表達(dá)量的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，miRNA-223在72h的表達(dá)量高于其0h的袁達(dá)量且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，miRNA-15a和miRNA-16在72h的表達(dá)量與各自0h的表達(dá)量相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;靶基因FOX

4、O1和ACVR2A的mRNAs表達(dá)量則逐漸升高，在48h達(dá)到最高點(diǎn)后逐漸減少，兩種目的基因mRNAs相對(duì)含量在24h、48h、72h的相對(duì)表達(dá)量均高于各自0h的表達(dá)量，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)THP-1細(xì)胞按分組分別轉(zhuǎn)染miRNA-223/15a/16模擬物后，M-223/15a/16組與模擬物對(duì)照組相比相應(yīng)的miRNA含量均明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;M-223/15a/16組FOXO1的mRNA水平和編碼蛋白表達(dá)量均

5、明顯低于模擬物對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;M-223/15a/16組ACVR2A的mRNA水平均低于模擬物對(duì)照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而ACVR2A編碼蛋白表達(dá)量與模擬物對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異。
　　(3)按分組分別轉(zhuǎn)染miRNA-223/15a/16抑制物后，I-223/15a/16組與抑制物對(duì)照組相比相應(yīng)的miRNA含量均明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;I-223/15a/16組FOXO1的mRNA水平和編碼蛋白表達(dá)量均明顯高于抑