利拉魯肽對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖、遷移、炎癥以及成骨分化潛能的影響.pdf

1、目的：
　　本次研究探討利拉魯肽（Liraglutide，LIRA）對(duì)牙周炎潛在的治療作用。選用經(jīng)典革蘭陰性菌E.Coli的LPS和人牙周膜細(xì)胞（Human periodontal ligament cells，hPDLCs）共培養(yǎng)來(lái)模擬牙周炎的病理過(guò)程，體外分析LIRA對(duì)LPS作用下hPDLCs增殖、遷移、炎癥以及成骨分化潛能的影響。
　　方法：
　　采用組織塊酶消化法原代培養(yǎng)hPDLCs，免疫組織化學(xué)染色法鑒定細(xì)胞

2、來(lái)源；茜素紅染色分析原代培養(yǎng)獲得的細(xì)胞是否擁有骨向分化潛能；qRT-PCR鑒定hPDLCs是否表達(dá)胰高血糖素樣肽-1受體（Glucagon-like peptide，GLP-1receptor，GLP-1R）；MTT法篩選LIRA和E.Coli LPS最佳作用濃度和時(shí)間并分析LIRA對(duì)LPS刺激下hPDLCs增殖活性的影響；劃痕試驗(yàn)分析LIRA對(duì)hPDLCs遷移能力的影響；qRT-PCR和Western Blot分析LIRA對(duì)LPS刺激

3、下hPDLCs炎癥因子表達(dá)（IL-6和TNF-α）以及成骨因子表達(dá)（ALP和Runx2）的影響。
　　結(jié)果：
　　1.組織塊酶消化法成功培養(yǎng)獲得hPDLCs，經(jīng)免疫組化染色鑒定：抗波形絲蛋白陽(yáng)性、抗角形蛋白陰性，證明細(xì)胞來(lái)源于間充質(zhì)，茜素紅染色證實(shí)了hPDLCs的成骨分化能力。
　　2.qRT-PCR結(jié)果顯示hPDLCs上存在GLP-1R mRNA的表達(dá)，并且LIRA可增加GLP-1R mRNA的表達(dá)。
　　3.

4、MTT結(jié)果：25,50,75,100,125nM LIRA培養(yǎng)24h后，均可增強(qiáng)hPDLCs的增殖活性（P<0.05），并呈劑量依賴性；認(rèn)為100nM為L(zhǎng)IRA的最佳藥物濃度。低濃度LPS（0.1,1,10μg/ml）可促進(jìn)hPDLCs的增殖活性，而高濃度LPS（100μg/ml）則抑制hPDLCs的增殖活性（P<0.05），呈時(shí)間依賴性；因此，選擇10μg/ml LPS與hPDLCs共培養(yǎng)來(lái)模擬牙周炎的發(fā)病過(guò)程。再者，LIRA可減弱高

5、濃度LPS對(duì)hPDLCs增殖活性的抑制作用（P<0.05）。
　　4.劃痕試驗(yàn)結(jié)果：LIRA可促進(jìn)hPDLCs的遷移能力，呈時(shí)間依賴性。
　　5.qRT-PCR結(jié)果：炎癥因子，與對(duì)照組相比，LPS組顯著增加IL-6和TNF-αmRNA的表達(dá)（P<0.01），LIRA組則可抑制IL-6和TNF-αmRNA的表達(dá)（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組顯著降低IL-6和TNF-αmRNA的表達(dá)（P<0.01）。成骨

6、因子，與對(duì)照組相比，LIRA組和LPS組均可增加ALP和Runx2mRNA的表達(dá)（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組則抑制ALP和Runx2mRNA的表達(dá)（P<0.05）。
　　6.Western Blot結(jié)果：炎癥因子表達(dá)結(jié)果與qRT-PCR結(jié)果基本一致；成骨因子表達(dá)結(jié)果則與qRT-PCR結(jié)果略有差異：與對(duì)照組相比，LIRA明顯促進(jìn)ALP和Runx2蛋白的表達(dá)（P<0.05），而LPS組則可抑制ALP和Runx

7、2蛋白的表達(dá)（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組則明顯增加ALP和Runx2蛋白的表達(dá)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.hPDLCs上存在GLP-1R的表達(dá)，LIRA可促進(jìn)GLP-1R的表達(dá)，并促進(jìn)hPDLCs的增殖活性和遷移能力；
　　2.LPS可誘導(dǎo)hPDLCs炎癥反應(yīng)，而抑制hPDLCs成骨分化，即LPS與hPDLCs共培養(yǎng)可以模擬牙周炎的病理過(guò)程；
　　3.LIRA不僅可以抑制hP