利拉魯肽對人牙周膜細胞增殖、遷移、炎癥以及成骨分化潛能的影響.pdf

1、目的：
　　本次研究探討利拉魯肽（Liraglutide，LIRA）對牙周炎潛在的治療作用。選用經(jīng)典革蘭陰性菌E.Coli的LPS和人牙周膜細胞（Human periodontal ligament cells，hPDLCs）共培養(yǎng)來模擬牙周炎的病理過程，體外分析LIRA對LPS作用下hPDLCs增殖、遷移、炎癥以及成骨分化潛能的影響。
　　方法：
　　采用組織塊酶消化法原代培養(yǎng)hPDLCs，免疫組織化學染色法鑒定細胞

2、來源；茜素紅染色分析原代培養(yǎng)獲得的細胞是否擁有骨向分化潛能；qRT-PCR鑒定hPDLCs是否表達胰高血糖素樣肽-1受體（Glucagon-like peptide，GLP-1receptor，GLP-1R）；MTT法篩選LIRA和E.Coli LPS最佳作用濃度和時間并分析LIRA對LPS刺激下hPDLCs增殖活性的影響；劃痕試驗分析LIRA對hPDLCs遷移能力的影響；qRT-PCR和Western Blot分析LIRA對LPS刺激

3、下hPDLCs炎癥因子表達（IL-6和TNF-α）以及成骨因子表達（ALP和Runx2）的影響。
　　結果：
　　1.組織塊酶消化法成功培養(yǎng)獲得hPDLCs，經(jīng)免疫組化染色鑒定：抗波形絲蛋白陽性、抗角形蛋白陰性，證明細胞來源于間充質，茜素紅染色證實了hPDLCs的成骨分化能力。
　　2.qRT-PCR結果顯示hPDLCs上存在GLP-1R mRNA的表達，并且LIRA可增加GLP-1R mRNA的表達。
　　3.

4、MTT結果：25,50,75,100,125nM LIRA培養(yǎng)24h后，均可增強hPDLCs的增殖活性（P<0.05），并呈劑量依賴性；認為100nM為LIRA的最佳藥物濃度。低濃度LPS（0.1,1,10μg/ml）可促進hPDLCs的增殖活性，而高濃度LPS（100μg/ml）則抑制hPDLCs的增殖活性（P<0.05），呈時間依賴性；因此，選擇10μg/ml LPS與hPDLCs共培養(yǎng)來模擬牙周炎的發(fā)病過程。再者，LIRA可減弱高

5、濃度LPS對hPDLCs增殖活性的抑制作用（P<0.05）。
　　4.劃痕試驗結果：LIRA可促進hPDLCs的遷移能力，呈時間依賴性。
　　5.qRT-PCR結果：炎癥因子，與對照組相比，LPS組顯著增加IL-6和TNF-αmRNA的表達（P<0.01），LIRA組則可抑制IL-6和TNF-αmRNA的表達（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組顯著降低IL-6和TNF-αmRNA的表達（P<0.01）。成骨

6、因子，與對照組相比，LIRA組和LPS組均可增加ALP和Runx2mRNA的表達（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組則抑制ALP和Runx2mRNA的表達（P<0.05）。
　　6.Western Blot結果：炎癥因子表達結果與qRT-PCR結果基本一致；成骨因子表達結果則與qRT-PCR結果略有差異：與對照組相比，LIRA明顯促進ALP和Runx2蛋白的表達（P<0.05），而LPS組則可抑制ALP和Runx

7、2蛋白的表達（P<0.05）；而與LPS組相比，LPS+LIRA組則明顯增加ALP和Runx2蛋白的表達（P<0.05）。
　　結論：
　　1.hPDLCs上存在GLP-1R的表達，LIRA可促進GLP-1R的表達，并促進hPDLCs的增殖活性和遷移能力；
　　2.LPS可誘導hPDLCs炎癥反應，而抑制hPDLCs成骨分化，即LPS與hPDLCs共培養(yǎng)可以模擬牙周炎的病理過程；
　　3.LIRA不僅可以抑制hP