丹酚酸B對(duì)人牙周膜細(xì)胞成骨影響的初步研究.pdf

1、目的：
　　牙周病是常見的和多發(fā)的一種口腔疾病，其常導(dǎo)致牙槽骨質(zhì)吸收，牙周再生研究一直是中外對(duì)治療牙周病方法的研究重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)探討我國(guó)中藥丹參主要活性成分丹酚酸B（Salvianolic acid B，SalB）對(duì)牙周再生種子細(xì)胞---人牙周膜細(xì)胞（periodontal ligament cells，PDLCs)成骨分化的影響，從而初步為丹酚酸B運(yùn)用于臨床牙周治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.刮取年輕正畸牙

2、牙周膜后運(yùn)用組織塊法，對(duì)人牙周膜細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng),鑒定后取第三代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　2.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。運(yùn)用MTT法檢測(cè)不同濃度丹酚酸B對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖活性影響。
　　3.成骨實(shí)驗(yàn)分組。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組（Con組）、標(biāo)準(zhǔn)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基組（OIM組）、標(biāo)準(zhǔn)成骨培養(yǎng)基+丹酚酸B組（OIM+Sal B組）：其中丹酚酸B濃度分別為0.1μ M、0.5μ M、1μ M、5μ M。
　　4.人牙周膜細(xì)胞堿性磷酸酶(Alkaline

3、phosphatase, ALP)活性測(cè)定。按實(shí)驗(yàn)分組培養(yǎng)7天后對(duì)hPDLCs進(jìn)行ALP活性測(cè)定。
　　5.人牙周膜細(xì)胞ALP染色。按實(shí)驗(yàn)分組培養(yǎng)7天后對(duì)hPDLCs進(jìn)行ALP染色。
　　6.礦化結(jié)節(jié)染色。按實(shí)驗(yàn)分組培養(yǎng)20天后運(yùn)用茜素紅染液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。
　　7.Real-time PCR檢測(cè)骨鈣素(osteocalcin，OCN)基因表達(dá)。按實(shí)驗(yàn)分組培養(yǎng)10天后，運(yùn)用Real-time PCR檢測(cè)人牙周膜細(xì)胞OC

4、N mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)并鑒定人牙周膜細(xì)胞。
　　2.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在丹酚酸B濃度為0.1μ M、0.5μ M、1μ M、5μ M時(shí)其對(duì)人牙周膜細(xì)胞增殖活性無(wú)影響。
　　3.ALP活性測(cè)定結(jié)果：當(dāng)?shù)し铀酈濃度為0.5μ M、1μ M、5μ M時(shí)均能增加人牙周膜細(xì)胞ALP活性，與OIM組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.ALP活性染色結(jié)果：OIM+Sal B（0.1

5、μ M、0.5μ M、1μ M、5μ M）組胞質(zhì)藍(lán)染程度高于OIM組。
　　5.礦化結(jié)節(jié)染色結(jié)果：當(dāng)?shù)し铀酈濃度為0.5μ M、1μ M、5μ M時(shí)人牙周膜細(xì)胞形成礦化結(jié)節(jié)數(shù)量明顯高于OIM組。
　　6.Real-time PCR結(jié)果：當(dāng)?shù)し铀酈濃度為0.5μ M、1μ M、5μ M時(shí)均能增加OCN mRNA表達(dá)，與OIM組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　適宜濃度的丹酚酸B能有效促進(jìn)人牙