竹葉黃酮的抗炎作用及物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、竹葉是我國(guó)傳統(tǒng)中藥，黃酮是其主要化學(xué)成分。研究表明竹葉中的黃酮類化合物有良好的抗炎功效，但其抗炎機(jī)制和物質(zhì)基礎(chǔ)并不清楚，本文將在前期竹葉抗炎作用的研究基礎(chǔ)上，對(duì)竹葉黃酮的抗炎作用做深入研究并闡明其物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　為優(yōu)化竹葉中總黃酮的提取工藝，通過正交試驗(yàn)優(yōu)選竹葉的浸提工藝條件。運(yùn)用L9(34)正交試驗(yàn)對(duì)竹葉黃酮浸提工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，以總黃酮的含量為檢測(cè)指標(biāo)，選取蘆丁作為對(duì)照品，采用紫外分光光度法測(cè)定竹葉提取液中總黃酮含量。結(jié)果表明

2、以70％甲醇溶液作為提取溶劑，料液比1:10，每次提取24小時(shí)，共提取3次為竹葉黃酮的最佳浸提工藝。
　　為純化竹葉中的黃酮類化合物，以MCI-GEL CHP20P填料洗脫竹葉黃酮提取物，濕法上樣，上樣濃度0.66g/ml，吸附流速為1BV/h，以80%甲醇溶液洗脫，洗脫流速為3BV/h，洗脫4柱體積，最后得到106g竹葉黃酮提取物干膏粉末；為分離竹葉黃酮的不同部位，以聚酰胺樹脂分離竹葉黃酮提取物，濕法上樣，吸附流速為1BV/h，

3、依次用蒸餾水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和100%甲醇洗脫，洗脫速度為2BV/h，每次洗脫3-5柱體積不等，最后得到蒸餾水洗脫部位34.5g、10%甲醇洗脫部位26.3g、30%甲醇洗脫部位7.7、50%甲醇洗脫部位8.6、75%甲醇洗脫部位5.1和100%甲醇洗脫部位1.1g。
　　為測(cè)定竹葉不同部位洗脫流份中總黃酮的含量，采用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)量，選取蘆丁作為對(duì)照溶液，在507nm處測(cè)定竹葉不同位洗脫流份

4、中總黃酮的含量。結(jié)果表明蘆丁對(duì)照品線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=17.71X+0.0225，r=0.9989，線性范圍為0.01mg-0.20mg，平均加樣回收率為99.41%，RSD=1.3%(n=6)。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，竹葉不同部位洗脫流份中總黃酮的含量差異較大，流份1、流份2、流份3、流份4、流份5和流份6中總黃酮含量分別為76.16mg/g、138.35mg/g、467.77mg/g、604.46mg/g、797.26m

5、g/g和300.95mg/g，為竹葉中黃酮類化合物的進(jìn)一步研究提供了科學(xué)依據(jù)。
　　通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，地塞米松(DXM)組、流份2至流份5組均對(duì)小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對(duì)小鼠耳廓腫脹抑制率依次為：61.88、64.57%、77.13%、62.33%和83.41%，流份1組對(duì)小鼠耳廓腫脹有抑制作用，與空白對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜

6、0.05)，其對(duì)小鼠耳廓腫脹抑制率為43.50%，流份6組對(duì)小鼠耳廓腫脹無明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過醋酸致小鼠腹腔血管通透性增加試驗(yàn)觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，流份5組對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的增加有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性增加的抑制率為66.73%，DXM組對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的增加有抑制作用，與空白對(duì)照組比較有顯著性

7、差異(P＜0.05)，其對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性增加的抑制率為53.62%，其余組分均對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性的增加無明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過小鼠氣囊滑膜炎試驗(yàn)觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明， DXM組、流份5組均對(duì)小鼠氣囊滑膜炎有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，其對(duì)小鼠氣囊滑膜炎抑制率依次為16.40%和19.55%，其余組分均對(duì)小鼠氣囊滑膜炎無明顯的抑

8、制作用，與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　通過小鼠肉芽腫試驗(yàn)觀察竹葉各提取部位抗炎作用。結(jié)果表明，DXM組、流份5組均對(duì)小鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較有極顯著差異(P＜0.01)，對(duì)小鼠棉球肉芽腫抑制率依次為36.98%和38.52%，流份4組對(duì)小鼠棉球肉芽腫有抑制作用，與空白對(duì)照組比較有顯著差異(P＜0.05)，對(duì)小鼠棉球肉芽腫抑制率為29.12%，其余組分均對(duì)小鼠棉球肉芽腫無明顯的抑制作用，

9、與空白對(duì)照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。最后，選取流份5為竹葉抗炎有效部位。
　　采用高效液相-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(HPLC-HR-TOF/MS)技術(shù)，對(duì)流份5中的主要化學(xué)成分進(jìn)行分析。采用Ultimate XB-C18(5μm,3.0×150mm)色譜柱，以乙腈和水(含體積比0.1%甲酸)為流動(dòng)相，梯度洗脫， ESI-TOF-MS正負(fù)離子Auto MSn采集模式。通過HPLC-TOF-MS所得到的化合物分子量以及MS/MS