延胡索抗心肌缺血活性部位物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、本論文分為五個(gè)部分 第一部分文獻(xiàn)研究綜述了近20年延胡索化學(xué)與藥理學(xué)研究概況，包括化合物結(jié)構(gòu)、藥效學(xué)、藥物代謝動(dòng)力學(xué)及毒性，并對(duì)其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心腦血管系統(tǒng)的作用和可能機(jī)制進(jìn)行重點(diǎn)歸納。參考文獻(xiàn)93篇。 第二部分延胡索中生物堿的富集工藝研究及抗心肌缺血活性部位篩選與驗(yàn)證以總生物堿含量為指標(biāo)確定了延胡索生物堿部位的純化工藝。通過(guò)對(duì)不同樹(shù)脂的篩選，確定了X-5型大孔樹(shù)脂對(duì)總生物堿成分具有良好的吸附分離性能。樹(shù)脂最大動(dòng)態(tài)上樣

2、量為1.99g生藥/1ml樹(shù)脂，以稀堿水洗脫10倍樹(shù)脂體積后，用50％乙醇洗脫，洗脫體積為10倍樹(shù)脂體積，樹(shù)脂經(jīng)95％乙醇和1％HCI再生后重復(fù)使用。3批樣品的制備和含量測(cè)定結(jié)果顯示純化工藝較穩(wěn)定，總生物堿含量大于50％。通過(guò)比較各部分提取物的抗心肌缺血活性，篩選得到了延胡索抗心肌缺血活性部位，驗(yàn)證了延胡索生物堿部位的抗心肌缺血活性。 第三部分活性部位化學(xué)成分研究采用多種純化分離方法和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)(UV，IR，ESI-MS，HR

3、MS，1HNIVIR，13CNMR，HMBC，NOESY)對(duì)延胡索抗心肌缺血活性部位的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，從中分離得到11個(gè)化合物，均為生物堿。其中叔胺堿2個(gè)，季銨堿9個(gè)(原小檗堿型季銨堿8個(gè)，阿樸菲型季銨堿1個(gè))。其中新化合物1個(gè)，結(jié)構(gòu)確定為5，6-二氫-10-羥基-2，3，9-三甲氧基-13-甲基-二苯基[a,g]喹嗪(5，6-dihydro-10-hydroxy-2，3，9-trimethoxy-13-methyl-Dibenz

4、o[a,g]quinolizinium)，暫命名為13-甲基脫氫紫堇達(dá)明堿(13-methyl-dehydrocorydalmine)；新天然產(chǎn)物1個(gè)，結(jié)構(gòu)確定為13-methyl-palmatrubine；三個(gè)化合物為首次從延胡索中獲得，分別為降氧化北美黃連次堿(noroxyhydrastinine)，corunine和dehydrocorybulbine。其它生物堿分別為四氫非洲防己堿(tetrahydrocolumbamine)，

5、脫氫延胡索堿(dehydrocorydaline)，非洲防己堿(columbamine)，黃連堿(coptisine)，巴馬汀(palmatine)和小檗堿(berberine)。 第四部分活性部位定性定量分析建立了延胡索活性部位的薄層鑒別方法。 采用酸性染料比色法建立了延胡索活性部位總生物堿的定量測(cè)定方法，結(jié)果表明方法精密性和重現(xiàn)性良好，回收率符合要求，可作為延胡索活性部位的質(zhì)量控制方法之一。 建立了延胡索活性

6、部位的HPLC特征指紋圖譜。通過(guò)對(duì)9批樣品的色譜檢測(cè)和圖譜分析，確認(rèn)指紋圖譜的主要技術(shù)參數(shù)為：在335nm下，有12個(gè)共有指紋峰，其相對(duì)保留時(shí)間RSD為0.10％～1.48％。相對(duì)峰面積RSD為3.57％～26.01％。共有峰占總峰面積比90％。 采用HPLC-MS-MS技術(shù)和添加對(duì)照品的方法對(duì)共有峰進(jìn)行了指認(rèn)。12個(gè)共有色譜峰中，確定了其中的11個(gè)，9個(gè)峰為季銨堿類(lèi)成分，其峰面積占總峰面積的80％以上，初步證明季銨堿成分是延胡

7、索抗心肌缺血的主要活性成分。 采用HPLC法，對(duì)延胡索活性部位中的8種季銨堿類(lèi)成分(dehydrocorydaline，columbamine，coptisine，palmatine，13-methyl-dehydrocorydalmine，13-methyl-palmatrubine．dehydrocorybulbine，berberine)的含量進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定，建立了靈敏，快速，可靠的含量測(cè)定方法，為制定科學(xué)、合理、嚴(yán)格的質(zhì)

8、量評(píng)價(jià)體系奠定了基礎(chǔ)。 第五部分活性成分吸收分布初步研究采用HPLC-MS-MS技術(shù)，對(duì)灌胃給藥后大鼠體內(nèi)的生物堿原型及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明活性部位中含量較大的季銨堿成分如脫氫延胡索堿，巴馬汀，小檗堿等在血液和組織中均能檢測(cè)到，說(shuō)明延胡索季銨堿成分能通過(guò)口服被胃腸道吸收。此外，還發(fā)現(xiàn)部分季銨堿以葡萄糖醛酸綴合物形式存在的體內(nèi)代謝產(chǎn)物。 在定性研究延胡索活性部位入血成分的基礎(chǔ)上，對(duì)其中的4種主要入血季銨堿成分的體