糖尿病大鼠痛覺減退與心肌缺血再灌注損傷易損性增加的相關性研究.pdf

1、目的：通過分析降鈣素基因相關肽（CGRP）、P物質(zhì)（SP）在心肌，背根神經(jīng)節(jié)及血清的表達變化與糖尿病大鼠痛覺減退、心肌易損性增加的關系，探討痛覺減退與糖尿病大鼠心肌缺血再灌注損傷易損性增加的相關性。
　　方法：⑴I型糖尿病大鼠模型的建立：200-250g雄性SD大鼠60只，腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ,50mg/kg)作為糖尿病組（DM組）。將注射STZ后一周內(nèi)血糖持續(xù)>16.7mmol/L為糖尿病造模成功

2、標準；同時喂養(yǎng)30只同周齡的正常大鼠作為對照，每周測量體重、血糖值、熱痛甩尾潛伏期（tail flick latency, TFL）；注射STZ第五周末采用ELISA法測定兩組大鼠血甘油三酯值并比較分析。⑵測量甩尾潛伏期及糖尿病分組：根據(jù)注射STZ后第5周末測得TFL值是否大于注射STZ前對照值的2倍，將糖尿病大鼠進一步分為DM1組（TFL<對照值 x2）和DM2組（TFL>對照值 x2）。⑶測量、分析兩組糖尿病大鼠CGRP、SP變化：

3、采用免疫熒光技術和和ELISA法測定心肌、上胸段（T1-5）和腰骶背根神經(jīng)節(jié)（DRG）及血清CGRP，SP的含量：并觀察其在心肌處的含量分布。分析DM1組和DM2組上述測量值差異。⑷心肌梗死面積及心肌細胞凋亡的分析：采用TTC染色法、TUNEL分析凋亡試劑盒測定分析心肌梗死面積及心肌細胞凋亡程度，并分析DM1組和DM2組上述測量值差異。⑸測量、分析糖尿病大鼠神經(jīng)生長因子（NGF）及辣椒素受體（TRPV1）：采用ELISA法和wester

4、n blot法分別定量分析缺血心肌NGF及TRPV1的表達變化。
　　結果：①糖尿病組大鼠造模五周后，與對照組相比，體重發(fā)生顯著降低降低（P<0.01），而血糖在造模早期即升高至糖尿病水平（24h后），且甘油三酯亦出現(xiàn)顯著升高。②糖尿病組大鼠甩尾潛伏期逐漸延長，至5w時有顯著性差異。與對照組相比， DM組的CGRP、SP在心肌、背根神經(jīng)節(jié)及血清處的含量均顯著下降（P<0.05），且DM2組中CGRP、SP含量顯著低于DM1組水平（

5、P<0.05）。③與I/R組正常大鼠相比，I/R組糖尿病大鼠心肌梗死面積顯著增加、心肌細胞凋亡比率均顯著升高（P<0.05）；DM組中，DM2組大鼠心肌缺血再灌注后，各項心肌損傷指標均顯著高于DM1組。與相應的假手術組比較，I/R組正常大鼠CGRP，SP顯著升高，I/R組糖尿病大鼠CGRP，SP升高不顯著。④與相應的假手術組比較，正常大鼠I/R組缺血心肌處TRPV1表達顯著升高（P<0.05），糖尿病I/R組TRPV1表達變化不顯著，并

6、且顯著低于非糖尿病組（P<0.05），且DM1組和DM2組相比，缺血心肌處TRPV1表達無顯著差異。各組NGF含量變化：與相應的假手術組比較，正常I/R組背根神經(jīng)節(jié)、缺血心肌及血清表達顯著升高（P<0.05），糖尿病I/R組NGF表達變化不顯著；與對照組相比，DM1組NGF含量顯著升高（P均<0.05），而DM2組NGF含量顯著下降（P<0.05）。
　　結論：⑴糖尿病組大鼠在注射STZ后痛覺逐漸減退，表現(xiàn)為甩尾潛伏期持續(xù)升高，而