雌性大鼠高齡生育對(duì)子代發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能力的影響.pdf

1、隨著社會(huì)發(fā)展，社會(huì)與經(jīng)濟(jì)壓力的增加，人們婚育觀念逐漸發(fā)生改變，使高齡生育呈逐年增加的趨勢(shì)。尤其是2016年我國(guó)二胎政策的全面實(shí)施，可以預(yù)見在未來的幾年內(nèi)我國(guó)將會(huì)呈現(xiàn)高齡生育的高峰。目前，高齡生育對(duì)子代的生長(zhǎng)和發(fā)育的影響尚無定論。一些流行病學(xué)證據(jù)表明高齡生育對(duì)子代有負(fù)面影響，子代患唐氏綜合征、精神障礙等疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高。也有流行病學(xué)研究則提出了不同的看法，認(rèn)為高齡生育和子女的神經(jīng)發(fā)育和智力之間相關(guān)。為了探討高齡生育對(duì)子代生長(zhǎng)發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能

2、力的影響，我們記錄了高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)，采用Morris水迷宮檢測(cè)高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代的空間學(xué)習(xí)和記憶能力，采用HE染色和尼氏染色觀察海馬形態(tài)學(xué)的變化。
　　目的：
　　研究高齡雌鼠與青年雌鼠生育的子代出生后發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)的差異，檢測(cè)高齡雌鼠與青年雌鼠子代2月齡學(xué)習(xí)記憶能力的差異及海馬形態(tài)學(xué)的差異。
　　材料與方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組：清潔級(jí)SD大鼠購自鄭州大

3、學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將6只3月齡和7只12月齡的雌性大鼠與隨機(jī)選擇的3月齡雄鼠單獨(dú)合籠，雌鼠懷孕后將雄鼠拿出，待雌鼠自然分娩。記錄每窩從雌雄合籠至仔鼠出生的天數(shù)。在分娩后24 h內(nèi)記錄每窩產(chǎn)仔數(shù)和雌雄性別比例。根據(jù)12月齡雌鼠的產(chǎn)仔數(shù)和雌雄比例，隨機(jī)選擇3月齡雌鼠所生仔鼠，將多余的仔鼠處死。將12月齡雌鼠所生仔鼠分為高齡生育組，3月齡雌鼠所生仔鼠分為青年生育組。
　　2.生育能力檢測(cè)：記錄合籠-分娩天數(shù)、每窩產(chǎn)仔數(shù)量、雌雄比例。

4、>　　3.仔鼠發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：詳細(xì)記錄仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天的體重，并記錄耳廓分離時(shí)間、切齒萌出時(shí)間和睜眼時(shí)間等。
　　4. Morris水迷宮檢測(cè)：將兩組仔鼠飼養(yǎng)至2月齡，采用Morris水迷宮連續(xù)7天對(duì)動(dòng)物進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)和空間搜索實(shí)驗(yàn)。
　　5.海馬組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)：在青年生育組與高齡生育組Morris水迷宮結(jié)束后處死大鼠并取腦組織，放入4％多聚甲醛固定并做石蠟包埋，石蠟連續(xù)冠狀切片進(jìn)行

5、HE染色和尼氏染色，鏡下觀察海馬組織的形態(tài)學(xué)特征。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)于青年生育組和高齡生育組仔鼠出生后的體重變化、Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期和游泳距離采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料的單因素方差分析。對(duì)于兩組生育能力、發(fā)育指標(biāo)、空間探索實(shí)驗(yàn)平臺(tái)穿越次數(shù)和目標(biāo)象限滯留時(shí)間百分比的比較，采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.生育能力的比較：

6、3月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)為23.17±0.82 d，12月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)為30.93±2.41 d，12月齡雌鼠合籠-分娩天數(shù)顯著長(zhǎng)于3月齡雌鼠（P<0.01）。3月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)為13.00±2.61只，12月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)為4.86±1.35只，12月齡雌鼠每窩產(chǎn)仔數(shù)顯著少于3月齡雌鼠（P<0.01）。3月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比為47.83±6.27%，12月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比為44.59±14.30%，1

7、2月齡雌鼠與3月齡雌鼠所生仔鼠雄性所占百分比無顯著差異（P>0.05）。
　　2.仔鼠發(fā)育過程中發(fā)育相關(guān)指標(biāo)：在兩組仔鼠出生后的第1、3、7、14、21、28天記錄兩組仔鼠的體重。各組每一時(shí)間點(diǎn)的體重均比前一時(shí)間點(diǎn)增加（P<0.01）。時(shí)間因素即體重增重天數(shù)的作用不隨分組的不同而有不同（P>0.05）。青年生育組和高齡生育組兩組隨時(shí)間變化的趨勢(shì)大致相同，青年生育組和高齡生育組之間不同時(shí)間點(diǎn)體重的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。青

8、年生育組仔鼠耳廓分離時(shí)間為3.57±0.31 d，高齡生育組仔鼠耳廓分離時(shí)間為3.66±0.29 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。青年生育組切齒萌出時(shí)間為8.22±0.57 d，高齡生育組為8.43±0.59 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。青年生育組睜眼時(shí)間為15.90±0.97 d，高齡生育組為16.18±0.55 d，兩組間無顯著差異（P>0.05）。
　　3. Morris水迷宮結(jié)果：水迷宮測(cè)試開始前一天測(cè)量?jī)?/p>

9、組動(dòng)物體重，高齡生育組與青年生育組大鼠體重并無顯著差異（P>0.05）。
　　定位航行實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過連續(xù)6天的訓(xùn)練，兩組的逃避潛伏期均顯著縮短（P<0.01），但高齡生育組潛伏期較青年生育組下降緩慢，且每日所測(cè)潛伏期均顯著長(zhǎng)于青年生育組（P<0.01）。定位航行實(shí)驗(yàn)的第1、2、3d高齡生育組尋找隱藏平臺(tái)游泳總距離顯著長(zhǎng)于青年生育組（P<0.05）。在第4、5、6d高齡生育組和青年生育組大鼠在尋找隱藏平臺(tái)時(shí)游泳距離的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

10、P>0.05）。
　　空間搜索實(shí)驗(yàn)：青年生育組在目標(biāo)象限游泳時(shí)間占總時(shí)間百分比為38.95±1.68％，高齡生育組為28.54±2.41％，高齡生育組在目標(biāo)象限游泳時(shí)間顯著少于青年生育組（P<0.05）。青年生育組穿越原平臺(tái)位置為3.57±0.32次，高齡生育組為1.74±0.27次，高齡生育組穿越原平臺(tái)位置次數(shù)顯著少于青年生育組（P<0.05）。
　　4.海馬組織形態(tài)學(xué)結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示，高齡生育組和青年生育組大鼠海馬

11、組織結(jié)構(gòu)層次清晰完整，顆粒細(xì)胞、錐體細(xì)胞等結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰可見，排列密集而且整齊，層次緊密，胞核大而圓，細(xì)胞膜完整，胞核居中清楚，細(xì)胞數(shù)量多而清晰，細(xì)胞周圍間隙緊密無水腫；青年生育組和高齡生育組組間無明顯差異。尼氏染色顯示，高齡生育組和青年生育組海馬 CA1、CA3區(qū)錐體細(xì)胞層細(xì)胞排列整齊緊密，呈錐體狀、圓球狀，胞質(zhì)呈深藍(lán)色，細(xì)胞數(shù)量多而密集；細(xì)胞核大而圓，位于中央，胞質(zhì)內(nèi)可見深藍(lán)色顆粒狀或斑塊狀尼氏體；高齡生育組和青年生育組組間無明