雌鼠高齡生育子代海馬Skp2和神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá).pdf

1、隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，女性受教育程度的提高，婚育年齡逐漸推遲，高齡生育逐漸增加成為一個(gè)社會(huì)問(wèn)題。特別是我國(guó)全面二胎政策的開(kāi)放，高齡生育已經(jīng)成為一種社會(huì)趨勢(shì)，越來(lái)越受到社會(huì)各界的重視。高齡生育除了對(duì)于產(chǎn)婦本身和生育結(jié)局具有不利影響外，同時(shí)也對(duì)嬰幼兒的生長(zhǎng)發(fā)育具有負(fù)面作用。但是，眾多研究報(bào)道中，母親高齡生育對(duì)子代神經(jīng)發(fā)育和智力的影響尚存在爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)室已采用 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)證明雌鼠高齡生育子代的學(xué)習(xí)記憶能力比適齡生育子代較低，并通過(guò)基

2、因芯片、qRT-PCR和Western blot證明一系列基因在雌鼠高齡生育子代新生期海馬中差異性表達(dá)。
　　為了進(jìn)一步探討高齡生育對(duì)子代生長(zhǎng)發(fā)育，特別是對(duì)神經(jīng)智力方面的影響，我們擬采用qRT-PCR法和免疫印跡法檢測(cè)雌性高齡生育子代海馬發(fā)育過(guò)程中S期激酶相關(guān)蛋白2（S-phase kinase-associated protein2, Skp2）基因動(dòng)態(tài)表達(dá)特性，及Skp2下游底物蛋白p27和p21表達(dá)特性。同時(shí)我們也記錄比較了

3、高齡生育子代與青年生育子代發(fā)育過(guò)程中的相關(guān)指標(biāo)和成年海馬組織內(nèi)神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)特性，在分子水平上進(jìn)一步探索高齡生育對(duì)子代海馬發(fā)育的影響。
　　目的：
　　研究雌鼠高齡生育對(duì)子代發(fā)育過(guò)程中相關(guān)發(fā)育指標(biāo)和海馬組織內(nèi) Skp2及p21、p27的影響，觀測(cè)成年后海馬組織內(nèi)神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)特性，探討其在海馬神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中的作用，以及對(duì)子代的成年后的學(xué)習(xí)、記憶、認(rèn)知的可能影響。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和分組

4、：選用清潔級(jí)SD（Sprague Dawley）大鼠（購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。青年雌鼠（3月齡）和高齡雌鼠（12月齡）。分別同隨機(jī)選擇的青年雄鼠（3月齡）合籠，所生仔鼠分別為青年組和高齡組。
　　2.生育能力檢測(cè)：記錄合籠-分娩天數(shù)、每窩產(chǎn)仔數(shù)和雌雄比例。
　　3.仔鼠發(fā)育過(guò)程中體重的檢測(cè)：記錄仔鼠出生第1、3、7、14、21、28、60天的體重。
　　4. Skp2及相關(guān)基因的檢測(cè)：仔鼠出生第1、3、7、14、2

5、1、28、60天處死后取海馬組織，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Skp2 mRNA表達(dá)，通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)Skp2及其底物p27、p21蛋白的表達(dá)。
　　5.成年子代海馬內(nèi)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)基因的檢測(cè)：通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)海馬內(nèi)神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因Edn1、Hspa4、Fos、Bcl2、Grin1 mRNA表達(dá)。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)于青年組和高齡組體重變化采用單因素方差分析。對(duì)于兩組

6、仔鼠雌雄比例、發(fā)育過(guò)程中各時(shí)間點(diǎn)的發(fā)育指標(biāo)及Skp2的表達(dá)量采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。
　　結(jié)果：
　　1.雌鼠生育能力：青年雌鼠和高齡雌鼠分別同隨機(jī)選擇的青年雄鼠合籠，高齡組的合籠至分娩天數(shù)比青年組顯著增加，產(chǎn)仔數(shù)則明顯降低（P<0.01），兩組子代雌雄比例無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　2.仔鼠發(fā)育過(guò)程中體重檢測(cè)：分別在仔鼠出生后第1、3、7、14、21、28、60天記錄體重。發(fā)現(xiàn)仔鼠出生后體

7、重隨時(shí)間的推移顯著增加，高齡組與青年組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.發(fā)育過(guò)程中Skp2、p27和p21表達(dá)檢測(cè)：高齡組和青年組子代海馬內(nèi)Skp2的mRNA表達(dá)量隨發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。高齡組中第7天Skp2的mRNA表達(dá)顯著低于青年組（P<0.05），其余各時(shí)間點(diǎn)兩組間無(wú)顯著性差異（P>0.05）。高齡組和青年組中 Skp2的蛋白表達(dá)量均隨發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降，出生第1~14天兩組間無(wú)顯著差異（P>

8、0.05），第21~60天高齡組子代海馬中Skp2表達(dá)顯著高于青年組（P<0.05）；高齡組和青年組中p27的蛋白表達(dá)量隨發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸下降，兩組間無(wú)顯著差異（P>0.05）；高齡組和青年組中p21的蛋白表達(dá)量隨發(fā)育時(shí)間的延長(zhǎng)增加，高齡組第28、60天p21表達(dá)顯著高于青年組（P<0.05）。
　　4.高齡組成年子代海馬內(nèi)神經(jīng)功能的相關(guān)基因mRNA檢測(cè)：高齡組成年子代（60天）海馬內(nèi)Edn1和Hspa4的表達(dá)量均顯著低于青年組