復(fù)發(fā)的狼瘡腎炎患者外周血中TRIM38 mRNA的表達(dá)及意義.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus, SLE)是一種侵犯多系統(tǒng)的,以多器官功能損傷為特征的自身免疫性疾病,狼瘡腎炎(Lupus nephritis, LN)是系統(tǒng)性紅斑狼瘡常見的并發(fā)癥,也是患者致殘的主要病因之一。LN是免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎炎,其發(fā)病機(jī)制尚不確切。目前認(rèn)為LN的發(fā)病機(jī)制可能與遺傳因素及 T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞功能紊亂有關(guān)。本課題組前期曾行基因篩查實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TRIM38(

2、tripartite motif-containing38) mRNA在初治的LN患者外周血中表達(dá)水平升高，提示其可能參與了LN的發(fā)病過程，但是目前暫無該基因在復(fù)發(fā)的LN中的表達(dá)情況及與LN病情活動度、臨床指標(biāo)等相關(guān)性的研究報(bào)道。
　　目的：本研究通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法檢測復(fù)發(fā)的LN患者治療前后外周血中TRIM38 mRNA表達(dá)水平變化，觀察其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，探討其與 LN復(fù)發(fā)的關(guān)系，旨在初步探索 TRIM38作為判

3、斷LN患者復(fù)發(fā)、療效預(yù)測的分子標(biāo)志物的可能性。該項(xiàng)無創(chuàng)性指標(biāo)的檢測,可能對于復(fù)發(fā)的LN患者的預(yù)后和治療方案的調(diào)整具有重大意義。
　　方法：
　　1.研究對象及分組
　　收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科2015年7月至2016年10月住院的復(fù)發(fā)的LN患者25例臨床資料作為治療前組，14例復(fù)發(fā)的LN患者接受2周激素及免疫抑制劑治療作為治療后組，所有入組患者均符合ACR修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)（2009）（附表1），無肝炎、結(jié)

4、核等傳染性疾病、各種感染性疾病、腫瘤及其他結(jié)締組織病。所有患者治療前后均進(jìn)行病情活動度評分（附SLEDAI評分表）。選取32例與患者組年齡、性別相匹配的健康志愿者作為健康對照組。所有患者均經(jīng)河北醫(yī)大二院倫理委員會批準(zhǔn)并簽署書面知情同意書。
　　2.研究方法
　　留取所有患者治療前后清晨空腹外周血，并記錄：24小時(shí)尿蛋白定量、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（Serum creatinine，

5、 Scr）、免疫球蛋白 A（Immunoglobulin A， IgA）、免疫球蛋白 G（Immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol， TC)、總膽固醇（Total bilirubin，TBIL）及其他實(shí)驗(yàn)室輔助檢查結(jié)果?？崭雇庵苎崛】?RNA，反轉(zhuǎn)錄為 cDNA。采用

6、qPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因與內(nèi)參基因（GAPDH），結(jié)果以單個PCR反應(yīng)達(dá)到對數(shù)擴(kuò)增期的循環(huán)數(shù)（cycle threshold,Ct)來表示。目的基因的Ct值減去GAPDH的Ct值，得到△Ct，基因的表達(dá)量由2-△Ct來表示。比較健康對照組、治療前及治療后組三組間目的基因表達(dá)水平的差異，及其與臨床、實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)性，并分析患者臨床指標(biāo)間的相關(guān)性。
　　3.統(tǒng)計(jì)方法
　　采用SPSS21.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對所有原

7、始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析及處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，不符合正態(tài)分布，應(yīng)用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）M(QR)表示。兩樣本計(jì)量資料的比較，若符合正態(tài)分布且方差齊時(shí)采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，若不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn)（U檢驗(yàn)）。多個獨(dú)立樣本比較服從正態(tài)分布采用方差分析，不服從正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn)（H檢驗(yàn)）。兩變量間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法，不服從正態(tài)分布采用Spearman相關(guān)分析。為研究基因表達(dá)水平的影響

8、因素，采用多元線性回歸分析，方法采用逐步回歸分析。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.健康對照組及患者血液標(biāo)本提取RNA
　　健康對照組RNA濃度為49.50（50.28），LN患者RNA濃度為84.60（74.06），純度OD260nm/280nm的比值約2.08±0.04，采用1％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示18S和28s條帶清晰，28S的亮度是18S的2倍左右，說明完整性良好

9、。
　　2.TRIM mRNA的擴(kuò)增
　　瓊脂糖電泳結(jié)果顯示TRIM38 mRNA條帶清晰且為單一條帶，與預(yù)期大小172 bp相一致。
　　3.TRIM38 mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果
　　實(shí)時(shí)熒光定量 RCR結(jié)果顯示擴(kuò)增良好，融解曲線為單峰，峰值為88.36，電泳結(jié)果顯示條帶單一、大小正確。
　　4.TRIM38 mRNA在健康對照組、復(fù)發(fā)的LN治療前組及治療后組中的表達(dá)情況
　　4.1.患者無

10、論治療前0.768（0.690）及治療后0.587（0.472），其TRIM38 mRNA表達(dá)水平較健康對照組0.361±（0.603）均升高，三組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.2.與健康對照組相比，復(fù)發(fā)的LN患者在治療前其TRIM38 mRNA的表達(dá)水平顯著增加，兩組間較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.3.治療后，TRIM38 mRNA的表達(dá)水平較治療前減低，但兩組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05

11、）。
　　4.4.治療后，TRIM38 mRNA的表達(dá)水平仍高于健康對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.TRIM38 mRNA表達(dá)水平與患者臨床指標(biāo)的相關(guān)性
　　TRIM38 mRNA表達(dá)水平與TG呈正相關(guān)（r=0.500，P=0.015），與補(bǔ)體C3呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.513，P=0.009），與補(bǔ)體C4、SLEDAI評分、24小時(shí)尿蛋白定量、BUN、Scr、IgA、IgG、IgM、TC、TBIL無

12、相關(guān)性（P＞0.05）。
　　6.研究基因表達(dá)水平的影響因素
　　多元線性回歸中采用逐步回歸分析顯示只有C3進(jìn)入方程，方程為：2-△Ct=1.143-0.782 C3（P＜0.05）。
　　7.按照抗ds-DNA抗體水平進(jìn)行分組，不同抗ds-DNA抗體水平患TRIM38 mRNA表達(dá)水平的比較
　　采用抗ds-DNA抗體比值取倒數(shù)進(jìn)行分組，不同抗ds-DNA抗體水平的患者TRIM38 mRNA的表達(dá)量（0.887

13、±0.714vs0.857±0.339）無顯著差異（P＞0.05）。
　　8.按照24小時(shí)尿蛋白水平進(jìn)行分組，不同尿蛋白水平的患者 TRIM38 mRNA表達(dá)水平的比較
　　不同尿蛋白水平的患者TRIM38 mRNA的表達(dá)量（0.763±0.463）vs（0.577±0.302）vs（0.832±0.474）無顯著差異（P＞0.05）。
　　9.經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后：SLEDAI評分，BUN、Scr、TBIL有統(tǒng)計(jì)

14、學(xué)意義（P＜0.05），IgA、24小時(shí)尿蛋白定量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.TRIM38 mRNA在復(fù)發(fā)的LN患者外周血中表達(dá)升高，提示該基因可能參與了LN復(fù)發(fā)過程，對探索LN的發(fā)病機(jī)制有重大意義，為LN的治療提供經(jīng)驗(yàn)。
　　2.TRIM38 mRNA表達(dá)量經(jīng)激素及免疫抑制劑治療后下降，但治療前后并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。
　　3.TRIM38很可能參與了LN的脂代謝異常。