Toll樣受體9在狼瘡腎炎患者外周血B淋巴細(xì)胞和腎組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景和目的： 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus：Erythematosus，SLE)是以自身反應(yīng)性T、B細(xì)胞異?；罨?、產(chǎn)生致病性自身抗體和免疫復(fù)合物為主要特征的一種慢性炎癥性自身免疫病，可累及全身多系統(tǒng)、多器官，腎臟是最常見(jiàn)的受累器官之一。狼瘡腎炎(Impus Nephritis，LN)的發(fā)病機(jī)制迄今不明，其嚴(yán)重程度直接影響了SLE預(yù)后，約有10﹪～25﹪患者發(fā)展為終末期。腎衰，成為SLE死亡的重要原因之一。

2、 Toll樣受體(toll-like：receptors，TLRs)是天然免疫中重要的病原體識(shí)別受體，通過(guò)識(shí)別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)誘導(dǎo)免疫效應(yīng)分子表達(dá)，激活多種前炎性因子參與抗感染過(guò)程。新近研究發(fā)現(xiàn)，TLRs與其相應(yīng)的特異性配體(包括內(nèi)源和外源性配體)結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞膜表面共刺激分子和MHC-Ⅱ類(lèi)分子表達(dá)，增強(qiáng)APC抗原呈遞；此外，該過(guò)程中分泌大量Th1型

3、細(xì)胞因子如IFNs，IL-6，IL-12和FNF-α，直接調(diào)控CTL、B細(xì)胞等免疫細(xì)胞成熟和功能化，參與并調(diào)控特異性免疫應(yīng)答過(guò)程，在天然免疫和特異性免疫之間架起橋梁。因此，TLRs與自身免疫性疾病的相關(guān)性日益受到關(guān)注。TLR家族成員TLR9因特異性識(shí)別細(xì)菌DNA和免疫復(fù)合物中非甲基化的CpG-DNA序列，啟動(dòng)MyD88依賴(lài)型信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活轉(zhuǎn)錄因子NF-кB、AP-1等，產(chǎn)生大量前炎癥因子及活化免疫細(xì)胞，參與和介導(dǎo)了B細(xì)胞

4、的活化、增殖及抗體產(chǎn)生，在自身免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程中發(fā)揮重要作用，故有研究者推測(cè)CpG-DNA/TLR9信號(hào)途徑可能與SLE和LN發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。對(duì)TLR9的深入研究將進(jìn)一步闡明狼瘡的發(fā)病機(jī)制，病情活動(dòng)和器官損害的基礎(chǔ)，以及感染在發(fā)病過(guò)程中的潛在作用等，同時(shí)也為治療提供新的思路。本研究分別采用細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞技術(shù)和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)狼瘡腎炎患者外周血B淋巴細(xì)胞及腎組織TL,R9的表達(dá)情況，并分析其與疾病活動(dòng)、臟器功能等臨床指標(biāo)的關(guān)系，探

5、討TLR9在LN中潛在的作用機(jī)制及其臨床意義。 方法: (1)采用細(xì)胞內(nèi)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)39例確診的LN患者和18例健康人外周血CDl9<'+>B淋巴細(xì)胞上TLR9的表達(dá)情況，并將LN患者按SLE疾病活動(dòng)指數(shù)．(SLEDAI)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)分為活動(dòng)期組和非活動(dòng)期組，分別對(duì)各組B細(xì)胞上TLR9表達(dá)差異進(jìn)行比較。此外對(duì)TLR9的表達(dá)情況與SL,EDAI、補(bǔ)體C3水平做相關(guān)性分析。 (2)采用免疫組化的方法對(duì)57例確診的LN

6、患者腎活檢組織和11例正常腎組織進(jìn)行TLR9檢測(cè)分析，并根據(jù)：ISN/RPS病理分型對(duì)TLR9在各型表達(dá)的程度和差異也進(jìn)行比較。此外對(duì)TLR9的表達(dá)與腎臟組織病理學(xué)指標(biāo)、臨床實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)做相關(guān)性分析。 結(jié)果： (1)活動(dòng)期LN患者(SLEDAI評(píng)分≥10)外周血CD19<'+B>細(xì)胞TLR9的表達(dá)率高于非活動(dòng)期LN患者及正常對(duì)照組(P<0．01)，而非活動(dòng)期LN患者B細(xì)胞TLR9表達(dá)率雖高于正常對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

7、0．05)；且活動(dòng)期LN患者中應(yīng)用中小劑量激素和(/或)免疫抑制劑對(duì)TLR9在CD19<'+>B細(xì)胞的表達(dá)無(wú)顯著影響(P>0．05)。 (2)LN患者外周血CD19<'+>B細(xì)胞TLR9的表達(dá)率與SLEDAI評(píng)分呈正相關(guān)(P<0．01)；與血清補(bǔ)體C3水平無(wú)明顯相關(guān)性(P>0．05)。 (3)正常腎組織中腎小球內(nèi)無(wú)或有極少量TLR9表達(dá)，腎間質(zhì)僅有少量浸潤(rùn)的細(xì)胞表達(dá)。與正常腎組織相比，各型LN患者腎組織中腎小球、。腎間質(zhì)

8、TLR9表達(dá)均較正常腎組織增高(P<0．05)，主要表達(dá)于腎臟浸潤(rùn)的細(xì)胞，且TLR9表達(dá)與腎臟病理類(lèi)型的嚴(yán)重程度有關(guān)，其中ISN/RPS的Ⅳ型LN腎組織TLR9表達(dá)水平較Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型明顯升高(P<0．01)。 (4)LN患者腎組織中腎小球TLR9表達(dá)水平與腎小球細(xì)胞增殖程度、LN腎臟病理活動(dòng)指數(shù)(AI)呈正相關(guān)(P<0．01)；腎間質(zhì)TLR9表達(dá)水平與AI、腎小管間質(zhì)損害程度也存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。 (1)LN患者腎組

9、織中腎小球TLR9表達(dá)水平與估計(jì)的腎小球?yàn)V過(guò)率(eGFR)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)、與24小時(shí)尿蛋白定量存在正相關(guān)(P<0.05)，與血清補(bǔ)體C3水平無(wú)相關(guān)(P>0.05)；而腎間質(zhì)TLR9表達(dá)水平與eGFR呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，與24小時(shí)尿蛋白定量、補(bǔ)體C3水平均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。 結(jié)論： (1)TLR9在LN患者外周血B細(xì)胞表達(dá)上調(diào)，提示TLR9參與了LN患者B細(xì)胞的異?；罨癓N的異常免疫過(guò)程。