GPER基因羥甲基化調(diào)控在胰島素誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜異常增生中的作用及機(jī)制.pdf

1、第一部分:胰島素通過(guò)增加GPER（G protein-coupled estrogen receptor）表達(dá)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖
　　目的:探討子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Hec-1a和Ishikawa中胰島素對(duì)GPER表達(dá)水平的影響和干擾GPER蛋白表達(dá)對(duì)胰島素促子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖能力的影響。
　　方法:Western-blotting和SRB法檢測(cè)不同濃度胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Hec-1a和Ishikawa細(xì)胞增殖能力的影響；

2、rt-PCR法篩選胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)揮作用的受體；Western-blotting和免疫熒光共聚焦試驗(yàn)檢測(cè)胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中GPER表達(dá)的影響；應(yīng)用干擾GPER表達(dá)的siRNA轉(zhuǎn)染Hec-1a和Ishikawa細(xì)胞，僅加入轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞作為陰性對(duì)照；Western-blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及干擾GPER表達(dá)對(duì)下游信號(hào)通路的影響；SRB法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力改變。
　　結(jié)果:胰島素通過(guò)調(diào)控AKT/PI3K通路磷酸化水平促

3、進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Hec-1a和Ishikawa的增殖；胰島素通過(guò)上調(diào)GPER的表達(dá)增加子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞對(duì)雌激素的敏感性；GPER參與調(diào)控胰島素促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖過(guò)程。
　　結(jié)論:胰島素可以通過(guò)上調(diào)GPER的表達(dá)增加子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞對(duì)雌激素的敏感性，從而調(diào)控 AKT/PI3K通路磷酸化水平，促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖，提示胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展存在促進(jìn)作用。
　　第二部分:胰島素通過(guò)增加TET1（Ten Eleven tr

4、anslocation1）表達(dá)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖
　　目的:探討子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Hec-1a和Ishikawa中胰島素對(duì)TET1的表達(dá)水平的影響和調(diào)控TET1蛋白表達(dá)對(duì)胰島素促子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖能力的影響。
　　方法:Western-blotting和免疫熒光共聚焦試驗(yàn)檢測(cè)胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中TET1表達(dá)的影響；應(yīng)用干擾TET1表達(dá)的siRNA轉(zhuǎn)染Hec-1a和Ishikawa細(xì)胞，僅加入轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞作為陰性對(duì)照；

5、Western-blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率及干擾TET1表達(dá)對(duì)下游信號(hào)通路的影響；SRB法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力改變。
　　結(jié)果:胰島素可以通過(guò)上調(diào)TET1的表達(dá)調(diào)控AKT/PI3K通路磷酸化水平，促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖。
　　結(jié)論:胰島素通過(guò)上調(diào)TET1的表達(dá)調(diào)控子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖，提示胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展具有促進(jìn)作用。
　　第三部分:TET1在子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)及其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖和遷移能力的影響

6、>　　目的:探討不同類(lèi)型子宮內(nèi)膜病變中TET1（Ten-Eleven Translocation1）的表達(dá)水平和干擾TET1蛋白表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系Hec-1a和Ishikawa細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法:免疫組化檢測(cè)組織中TET1的表達(dá)；應(yīng)用干擾TET1表達(dá)的siRNA轉(zhuǎn)染Hec-1a和Ishikawa細(xì)胞，僅加入轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞作為陰性對(duì)照；Western-blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率；SRB法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力改變；Tr

7、answell侵襲試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力改變；劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力改變；流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞周期改變。
　　結(jié)果:子宮內(nèi)膜組織中TET1的表達(dá)隨病理類(lèi)型進(jìn)展而升高；干擾組TET1蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組；干擾TET1表達(dá)后子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力均受到不同程度抑制，同時(shí)出現(xiàn) G1/S期細(xì)胞周期阻滯。
　　結(jié)論:子宮內(nèi)膜癌及子宮內(nèi)膜增生性病變組織中TET1表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照組織；干擾TET1表達(dá)后子宮內(nèi)膜

8、癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力下降，且出現(xiàn)G1/S期細(xì)胞周期阻滯，提示TET1在子宮內(nèi)膜癌的增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　第四部分:胰島素通過(guò)上調(diào)TET1促進(jìn)GPER啟動(dòng)子區(qū)域羥甲基化增加GPER表達(dá)
　　目的:探討胰島素對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中GPER啟動(dòng)子區(qū)域羥甲基化水平的調(diào)控及TET1在其中發(fā)揮的作用。
　　方法:組織芯片和免疫組化檢測(cè)不同類(lèi)型子宮內(nèi)膜組織中GPER和TET1的表達(dá)及其相關(guān)性；Western-blo