子宮內膜癌抑癌基因甲基化及UHRF1復合體表觀遺傳調控的研究.pdf

1、研究目的:為子宮內膜癌(Endometrial carcinoma，EC)的診斷尋找新的甲基化標志物，并進一步探索EC關鍵抑癌基因的表觀遺傳調控機制。
　　研究方法:(1)運用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR，MSP)法檢測155例子宮內膜標本（正常內膜27例，單純性增生22例，復雜性增生29例，不典型增生18例和子宮內膜樣腺癌59例）6個抑癌基因(tumor suppressor genes，

2、TSGs)（CDH13，SHP1，HIN1，DKK3，CTNNA1和PCDH8）啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。(2)單獨或聯合應用5-氮雜-2'-脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)處理子宮內膜樣腺癌Ishikawa和Kle細胞株，實驗分為四組（未處理組，5-Aza-CdR組，TSA組和5-Aza-CdR+TSA組）。運用MSP和實時定量PCR(reve

3、rse transcription real-timequantitative PCR，qRT-PCR)等實驗方法分別檢測2個細胞株各組中CDH13和SHP1基因的甲基化狀態(tài)以及RNA表達水平的變化。(3)運用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)技術檢測兩個細胞株的各組中UHRF1蛋白是否能夠共沉淀PRMT5蛋白以及兩者之間的關系。
　　結果:(1)在EC中，CDH13和SHP1啟動子區(qū)存在著較高

4、的甲基化率（分別為81.36％和86.44％），而其他四個抑癌基因（HIN1，DKK3，CTNNA1和PCDH8）的甲基化率則較低（分別為8.47％，15.25％，20.34％和16.95％）。CDH13不僅在EC中的甲基化率較高，在復雜增生和不典型增生中同樣出現了較高的甲基化率（分別為51.72％和50.00％），且其甲基化率與患者年齡、腫瘤分化程度以及腫瘤浸潤深度存在相關性(p＜0.05)。SHP1僅在EC中存在較高的甲基化率，且與

5、患者年齡和腫瘤分化程度相關(p＜0.05)。(2)在Ishikawa和Kle細胞株中:未處理組CDH13和SHP1啟動子區(qū)處于完全甲基化狀態(tài);5-Aza-CdR或TSA單獨處理后CDH13和SHP1啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)被部分逆轉，同時RNA的表達量增加(p＜0.01);5-Aza-CdR和TSA聯合處理組CDH13和SHP1啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)被完全逆轉，且RNA水平顯著升高(p＜0.01)。(3)未處理組、5-Aza-CdR或TSA單獨或