抗氧化劑在減輕ARDS肺纖維化中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本課題首先通過臨床觀察膿毒癥ARDS（Acute respiratory distress syndrome，ARDS）患者呼吸末氫的變化，提示我們氫可能在ARDS肺損傷及修復(fù)中起一定作用；然后我們通過構(gòu)建內(nèi)毒素（Lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠ARDS肺纖維化模型，重點(diǎn)觀察補(bǔ)充外源性氫對LPS誘導(dǎo)肺纖維化是否具有保護(hù)作用，并對氫的作用機(jī)制進(jìn)行研究；與此同時(shí)，我們還觀察了天然的抗氧化劑白藜蘆醇（

2、Resveratrol，RSV）在LPS誘導(dǎo)肺纖維化中的作用，并探討相關(guān)機(jī)制。
　　內(nèi)容和方法：
　　第一部分：通過收集臨床中膿毒癥 ARDS患者及健康志愿者呼吸氣體，用氣相色譜分析法對其中氫的含量進(jìn)行檢測。第二部分：ICR小鼠隨機(jī)分為對照組，模型組，富氫生理鹽水組。模型組小鼠予以單次氣管內(nèi)滴注LPS（5mg/kg）構(gòu)建小鼠肺纖維化模型，觀察7d，14d，21d，28d時(shí)肺組織的病理演變過程。采用Masson染色觀察肺組織病

3、理膠原分布情況；堿性水解法與ELISA法檢測肺組織中羥脯氨酸及I型膠原含量評估肺臟纖維化的程度；免疫組化染色、Western Blot方法檢測肺組織中E-cadherin和a-SMA的表達(dá)變化觀察上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）的進(jìn)展；ELISA法檢測TGF-β1含量，Western Blot方法檢測p-Smad2/Smad3、Smad4蛋白水平表達(dá)的改變反映TGF-β1下游信號

4、通路的變化；檢測MDA含量，T-AOC、SOD、CAT活性反映肺組織的氧化應(yīng)激水平。富氫生理鹽水組分為3個(gè)亞組，在氣管滴注LPS后即刻分別腹腔注射富氫生理鹽水（2.5、5、10 ml/kg），每天給予等量的氫水，持續(xù)28天。對照組：氣管內(nèi)滴注與模型組等量的生理鹽水，同時(shí)腹腔注射等量的生理鹽水，每天1次，觀察28天，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)行上述相關(guān)檢測。第三部分：ICR小鼠隨機(jī)分為對照組，模型組，白藜蘆醇組，白藜蘆醇組在氣管內(nèi)滴注LPS后即刻腹腔注

5、射RSV（0.3mg/kg），每天給予等量的RSV，持續(xù)28天。對照組及模型組處理同第二部分，腹腔注射等量的RSV溶劑，每天一次，持續(xù)28天，然后進(jìn)行相關(guān)檢測（同第二部分）。
　　主要結(jié)果：
　　第一部分：ARDS患者與健康人相比，呼吸氫含量明顯減少。第二部分：LPS處理21至28天后，可造成肺組織中膠原分布增加，羥脯氨酸及I型膠原含量增多；LPS可誘導(dǎo)EMT的進(jìn)程；在LPS作用21至28天后，LPS刺激TGF-β1生成明顯

6、增多，激活其下游的Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，并可誘導(dǎo)快速的氧化應(yīng)激的發(fā)生，表現(xiàn)為7天時(shí)MDA明顯增多，T-AOC，CAT，SOD活性明顯下降，并可持續(xù)4周。相反，富氫生理鹽水可減輕LPS誘導(dǎo)的EMT及肺纖維化程度，抑制LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激及TGF-β1生成。第三部分：白藜蘆醇也可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的EMT，減輕肺組織纖維化的程度。同時(shí)，白藜蘆醇可抑制LPS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，TGF-β1生成及Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活。
　　結(jié)論：