基于果糖自氧化的抗氧化劑篩選方法研究.pdf

1、隨著自由基醫(yī)學(xué)和自由基生物學(xué)的發(fā)展，自由基和病變的關(guān)系越來越受到人們的關(guān)注。為此，清除自由基的研究日益引起人們的重視?？蒲腥藛T建立了許多篩選抗氧化劑和評價抗氧化劑抗氧化能力的自由基產(chǎn)生體系，如經(jīng)典的產(chǎn)生·OH的Fenton反應(yīng)和類 Fenton反應(yīng)體系、產(chǎn)生O2-·的鄰苯三酚體系以及穩(wěn)定自由基DPPH·、ABTS+體系等。然而，這些自由基產(chǎn)生體系生成的自由基均是單一的或者有的自由基并不存在于人體內(nèi)，與機體的實際情況不符。人體內(nèi)產(chǎn)生的自由

2、基是多樣的、且處于不斷變化過程中。自由基的種類、活性、壽命等與其所處的環(huán)境有關(guān)。而抗氧化劑的抗氧化能力與其清除的自由基種類、活性、環(huán)境等密切相關(guān)，因此僅僅依據(jù)清除某一特定的無變化的自由基難以說明抗氧化劑的實際抗氧化能力，缺乏生理學(xué)和病理學(xué)意義。
　　研究表明高血糖患者體內(nèi)單糖的自氧化可產(chǎn)生多種大量活性氧自由基，本文以果糖自氧化過程產(chǎn)生自由基，研究了產(chǎn)生穩(wěn)定自由基體系的條件，并基于此自由基產(chǎn)生體系進行了抗氧化劑抗氧化能力的評價和篩選

3、。果糖自氧化過程產(chǎn)生動態(tài)活性氧自由基與人體內(nèi)自由基的種類及變化過程相近，以此作為篩選抗氧化劑的體系能全面評價抗氧化劑的抗氧化能力并且有著重要的生理學(xué)和病理學(xué)意義。本文的主要研究內(nèi)容如下：
　　①通過考察果糖自氧化的影響因素，對果糖自氧化體系的條件進行優(yōu)化，建立果糖自氧化體系產(chǎn)生自由基的方法。分別考察了果糖的濃度，催化劑的濃度，溫度，pH值等對果糖自氧化的反應(yīng)速率的影響。產(chǎn)生的活性氧自由基最終轉(zhuǎn)化為·OH，以苯甲酸鈉捕獲并評價自由基

4、的量。并采用鹽酸小檗堿和阿魏酸初步驗證了建立的自由基生成體系評價抗氧化能力的方法。
　?、诨诠亲匝趸w系以熒光為檢測手段對九種抗氧化劑的抗氧化能力進行評價，抗氧化能力選用IC50（半數(shù)抑制濃度）的大小作為比對的依據(jù)。結(jié)果表明多酚類抗氧化劑的抗氧能力與其分子中酚羥基，酮基的個數(shù)有密切關(guān)系，分子中酚羥基和酮基的個數(shù)越多抗氧化能力越強。而生物堿類的抗氧化劑的抗氧化能力和分子中―裸露的氮原子有關(guān)。
　?、刍诠亲匝趸w系以高效

5、液相色譜為檢測手段，對九種抗氧化劑的抗氧化能力做出評價，以抑制果糖自氧化的裂解標(biāo)志性產(chǎn)物-甲醛為參考標(biāo)準(zhǔn)，通過比較 IC50對抗氧化劑的抗氧化能力做出評價。研究結(jié)果表明：多酚類抗氧化劑分子中的酚羥基和酮基的個數(shù)越多其抑制甲醛的效果越明顯，即抗氧化能力越強。這和用熒光的方法評價結(jié)果一致。
　?、軈⒄展亲匝趸臈l件應(yīng)用經(jīng)典的DPPH·體系，評價了九種抗氧化劑的抗氧化能力。結(jié)果表明：一些水溶較好多酚類的抗氧化劑的抗氧化能力與其分子中酚

6、羥基、酮基的個數(shù)有關(guān)。其結(jié)果與熒光、液相方法的評價結(jié)果一致。但是，由于 DPPH體系是有機溶劑體系并且要求在短時間內(nèi)完成反應(yīng)，因此限制了一些水溶性抗氧化劑的應(yīng)用，對一些需要長時間反應(yīng)的抗氧化劑的評價也有一定限制。
　?、菰诳寡趸瘎┭芯窟^程中發(fā)現(xiàn)Trolox的抗氧化現(xiàn)象存在異常，即在果糖自氧化體系中經(jīng)典的抗氧化劑Trolox（水溶性的維生素E）有時不但不表現(xiàn)出抗氧化能力反而有―助氧化作用。為此，采用NBT（氯化硝基四氮唑藍）捕獲超氧