南豐蜜橘β-胡蘿卜素羥化酶基因的克隆和分析.pdf

1、β-胡蘿卜素羥化酶是植物類胡蘿卜素合成代謝途徑中的關(guān)鍵酶，它催化了植物中β-胡蘿卜素經(jīng)中間產(chǎn)物β-隱黃素合成玉米黃素的過程。β-胡蘿卜素羥化酶廣泛存在于植物、藍(lán)藻和細(xì)菌等生物中，其基因在高等植物中多成對(duì)出現(xiàn)，在原核生物中則處于基因簇內(nèi)。該酶是一種無(wú)血紅素雙鐵單加氧酶，分子中有富含保守組氨酸的模體。多種生物的β-胡蘿卜素羥化酶基因已被克隆并分別在細(xì)菌、藍(lán)藻或植物中表達(dá)。玉米黃素能幫助植物抵御脅迫環(huán)境，β-隱黃素對(duì)癌癥等人類疾病有抑制作用。

2、采用基因工程手段改造β-胡蘿卜素羥化酶基因，將為培養(yǎng)高抗逆性作物和大規(guī)模生產(chǎn)β-隱黃素這種抗癌物質(zhì)提供新途徑。 本論文根據(jù)已報(bào)道的多種柑橘B．胡蘿卜素羥化酶基因保守序列，設(shè)計(jì)4對(duì)引物。用它們擴(kuò)增南豐蜜橘基因組DNA，得到四條長(zhǎng)度為470bp，761bp，294bp，991bp的片段。將這些片段克隆到pMD180-T載體，并進(jìn)行測(cè)序。測(cè)序結(jié)果拼接成一條長(zhǎng)2326bp的全長(zhǎng)序列。分析發(fā)現(xiàn)該基因含六個(gè)內(nèi)含子，七個(gè)外顯子。內(nèi)含子長(zhǎng)度與