羧基蒼術(shù)苷、蒼術(shù)苷含量測(cè)定新方法及轉(zhuǎn)化規(guī)律研究.pdf

1、目的:(1)建立反相離子對(duì)高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒼耳子中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的含量，解決現(xiàn)行分析方法雜質(zhì)干擾大，部分樣品沒有達(dá)到基線分離的缺陷。(2)建立含蒼耳子中成藥的供試品溶液的高效富集純化方法，應(yīng)用反相離子對(duì)色譜法，測(cè)定中成藥中主要毒性成分蒼術(shù)苷的含量。(3)建立液質(zhì)聯(lián)用方法(UPLC-MS/MS)同時(shí)測(cè)定中成藥中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的含量，為含蒼耳子類中成藥的安全性評(píng)價(jià)提供質(zhì)量控制方法。(4)探究蒼耳子煎煮過程中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的

2、動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為含蒼耳子類中成藥生產(chǎn)及其過程控制提供參考。
　　方法:(1)采用高效液相色譜法，以Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0μm）為色譜柱;流動(dòng)相為乙腈-0.15％磷酸二氫鈉溶液（含0.12％四丁基氫氧化銨，磷酸調(diào)pH至3.5）(39:61);檢測(cè)波長為203 nm。(2)中成藥樣品用水超聲處理，水提液分別上D101型大孔樹脂柱和WAX固相萃取小柱除雜并富集純化蒼術(shù)苷，制備供

3、試品溶液。(3)應(yīng)用Agilent1290型超高液相色譜儀串聯(lián)Agilent6460型三重四極桿質(zhì)譜儀，采用電噴霧(ESI)離子源，多反應(yīng)離子檢測(cè)（MRM）負(fù)離子，羧基蒼術(shù)苷、蒼術(shù)苷、氯霉素內(nèi)標(biāo)的定量分析離子分別為m/z769.1→688.8、725.0→644.9、320.8→151.7。(4)采用反相離子對(duì)色譜法，考察煎煮時(shí)間對(duì)蒼耳子水煎液中羧基蒼術(shù)苷、蒼術(shù)苷含量的影響。
　　結(jié)果:(1)所建立的反相離子對(duì)色譜法，羧基蒼術(shù)苷、

4、蒼術(shù)苷進(jìn)樣量分別在0.15～3.7μg（r=0.9999）和0.10～2.5μg(r=1.000)范圍呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為101.4％(RSD1.7％)、101.6％(RSD1.2％)。(2)所建立的中成藥供試品溶液的制備方法，除去了大部分雜質(zhì)干擾，且富集了蒼術(shù)苷的濃度，平均回收率為95.7％(RSD1.2％)，采用上述反相離子對(duì)色譜法測(cè)得5種中成藥中蒼術(shù)苷含量分別為226.3、464.6、386.1、66.0、1044.

5、7μg·g-1。(3)所建立的UPLC-MS/MS法，羧基蒼術(shù)苷、蒼術(shù)苷進(jìn)樣量分別在9.73～973 ng·mL-1、50.5～4040 ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為98.9％(RSD4.3％)、102.4％(RSD3.8％)，測(cè)定了8種中成藥中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷的含量。(4)生蒼耳子水煎煮2h內(nèi)，羧基蒼術(shù)苷、蒼術(shù)苷含量均迅速升高，此階段以溶出為主，2h后蒼術(shù)苷含量繼續(xù)升高，而羧基蒼術(shù)苷則持續(xù)降低，此階段以羧基蒼術(shù)

6、苷轉(zhuǎn)化為蒼術(shù)苷為主;炒蒼耳子不含羧基蒼術(shù)苷，水煎液中蒼術(shù)苷含量持續(xù)升高，2h內(nèi)迅速增加，2h后緩慢上升并趨于平穩(wěn)，提示蒼術(shù)苷較穩(wěn)定。
　　結(jié)論:(1)反相離子對(duì)色譜法顯著地改善了羧基蒼術(shù)和蒼術(shù)苷的分離效果，可同時(shí)測(cè)定二者的含量，方法簡(jiǎn)便可行。(2)D101型大孔樹脂和WAX固相萃取小柱聯(lián)用可高效除雜并富集蒼術(shù)苷，適用于復(fù)雜樣品的前處理制備供試品溶液。(3)中成藥中羧基蒼術(shù)苷和蒼術(shù)苷含量差異很大，可采用UPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定