牙周炎對肥胖小鼠腎組織的結(jié)構(gòu)及炎癥因子表達(dá)的影響研究.pdf

1、目的：
　?。?）建立肥胖合并牙周炎的小鼠模型。
　?。?）檢測分析模型小鼠各組體內(nèi)血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)情況。
　?。?）觀察分析牙周炎對肥胖模型小鼠的腎組織結(jié)構(gòu)，腎組織炎癥因子表達(dá)的影響。
　　方法：
　　第一章、
　?。?）C57BL/6J小鼠44只隨機(jī)分為兩組，其中一組為高脂飼料組（HF）行高脂飼料喂養(yǎng)，另一組為低脂飼料組（LF）行低脂飼料喂養(yǎng)，每組小鼠各22只。<

2、br>　?。?）飼養(yǎng)至16周時，兩組分別隨機(jī)選取11只小鼠以牙齦卟啉單胞菌絲線對小鼠上頜雙側(cè)第二磨牙進(jìn)行真性結(jié)扎，余下小鼠行假性結(jié)扎。結(jié)扎時間為10天，隨后實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ托∈笱葑優(yōu)樗慕M：單純肥胖組（HFC）,肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）,單純牙周炎組（LFP）,對照組（LFC）。
　?。?）在小鼠飼養(yǎng)的過程中每周以及結(jié)扎后處死時測量匯總所有小鼠的體重?cái)?shù)據(jù)，應(yīng)用單因素方差分析來比較高脂飼料組（HF）與低脂飼料組（LF）小鼠體重的差異，以評估

3、小鼠肥胖模型的建立情況以及肥胖模型的維持情況。
　?。?）結(jié)扎10天處死所有的小鼠以獲取模型小鼠的上頜骨組織并進(jìn)行脫鈣和包埋切片，隨后對小鼠上頜骨切片進(jìn)行HE染色，定性觀察分析真性結(jié)扎組與假性結(jié)扎組小鼠牙周組織的差異，以評估小鼠牙周炎模型的建立情況。
　　第二章、單眼球取血法獲取小鼠血液，蛋白芯片法檢測各組小鼠血清內(nèi)炎癥因子TNF-α，IL-1β，IL-6表達(dá)水平的差異。
　　第三章、
　?。?）結(jié)扎10天后處死

4、小鼠，獲取小鼠左右兩側(cè)腎組織并稱重。
　?。?）熒光定量PCR檢測模型小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子TNF-α，IL-1β，IL-6的mRNA的表達(dá)。
　　（3）將獲取的小鼠腎組織制作成切片并行HE、Masson染色以及炎癥因子IL-1β的免疫組織化學(xué)染色，以觀察牙周炎對肥胖模型小鼠的腎組織結(jié)構(gòu)和腎組織內(nèi)炎癥因子表達(dá)水平的影響。
　　結(jié)果：
　　第一章、
　　（1）0周時，高脂飼料組（HF）與低脂飼料組（LF）的小鼠

5、體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0.864，P>0.05）；One-way ANOVA顯示：從飲食誘導(dǎo)第1周開始，高脂飼料組（HF）的小鼠體重大于低脂飼料組（LF）的小鼠體重，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。第16周時高脂飼料組與低脂飼料組相比，高脂飼料組小鼠體重較低脂飼料組小鼠增加約13.4g(43.5％),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　（2）各組小鼠絲線結(jié)扎后第10天，低脂飼料組(LF)的體重下降了約9.7%（3g），高脂飼

6、料組(HF)的體重下降16.1%（7.1g）。第16周結(jié)扎前的高脂飼料組(HF)小鼠體重較同期低脂飼料組(LF)高約43.5%（13.4g），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；而結(jié)扎后第10天高脂飼料組(HF)小鼠的體重仍較同期低脂飼料組(LF)高約33.5%（9.3g），差異仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。以上結(jié)果表明，為期10天的絲線結(jié)扎過程中，高脂飼料組（HF）與低脂飼料組（LF）小鼠體重均降低，但小鼠在絲線結(jié)扎10天后高

7、脂飼料組（HF）小鼠的體重仍高于低脂飼料組（LF）約33.5%。根據(jù)體重超過對照組10g或20%為顯性肥胖的標(biāo)準(zhǔn)，模型小鼠仍處于顯性肥胖的狀態(tài)。
　?。?）100倍鏡下，肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）與單純牙周炎組（LFP）均表現(xiàn)為：牙齦乳頭萎縮，牙齦上皮根向移位，牙槽嵴頂吸收；單純肥胖組（HFC）與對照組（LFC）均表現(xiàn)為：牙齦乳頭完整，牙齦上皮無明顯移位，牙槽嵴頂無明顯吸收；200倍鏡下發(fā)現(xiàn)肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）與單純牙周炎組

8、（LFP）牙槽骨內(nèi)均可見呈點(diǎn)狀分布的破骨細(xì)胞；單純肥胖組（HFC）與對照組（LFC）均未見明顯的破骨細(xì)胞分布。
　　第二章、
　?。?）對于TNF-α，肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.061，P=0.806）。不同飼料組的TNF-α的血清濃度差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.904，P=0.173），不同結(jié)扎組的TNF-α的血清濃度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。真性結(jié)扎組（P）的TNF-α血清濃度水平顯著低于假性結(jié)

9、扎組（C）（F=13.6，P<0.001）。單因素方差分析顯示，與單純肥胖組（HFC）相比，肥胖復(fù)合牙周炎組血清炎癥因子的TNF-α濃度顯著降低，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　?。?）對于IL-1β，肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.259，P=0.266）。不同飼料組、不同結(jié)扎組的IL-1β的血清濃度差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高脂飼料組（HF）的IL-1β血清濃度水平顯著高于低脂飼料組（LF）（F=15

10、.375，P<0.001），真性結(jié)扎組（P）的IL-1β血清濃度水平顯著低于假性結(jié)扎組（C）（F=5.056，P=0.028）。單因素方差分析顯示，單純肥胖組（HFC）的IL-1β血清濃度水平顯著高于對照組（LFC）（F=11.045，P=0.002），也顯著高于肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）（F=19.948，P<0.001）。
　?。?）對于IL-6，肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=19.316，P<0.001）。不同飼

11、料組、不同結(jié)扎組的血清IL-6濃度差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高脂飼料組（HF）的血清IL-6濃度水平顯著高于低脂飼料組（LF）（F=26.837，P<0.001），真性結(jié)扎組的血清IL-6濃度水平顯著低于假性結(jié)扎組（F=12.4，P=0.001）。單因素方差分析顯示，單純肥胖組（HFC）的血清IL-6濃度水平顯著高于對照組（LFC）（F=22.841，P<0.001），也顯著高于肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）（F=16.715，P

12、<0.001）。
　　第三章、
　?。?）對于結(jié)扎10天后小鼠腎組織重量，肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.985，P=0.506）。不同飼料組的小鼠腎組織重量差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高脂飼料組（HF）的小鼠腎組織重量顯著高于低脂飼料組（LF）（F=18.2，P<0.001）。T檢驗(yàn)分析顯示，單純肥胖組（HFC）的小鼠腎組織重量顯著高于對照組（LFC）（t=20.188，P=0.001）。
　?。?

13、）HE染色：高脂飼料組（HF）小鼠的腎組織均表現(xiàn)為空泡性變，病變位置多位于腎小管管壁，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，嚴(yán)重者可見腎小管形態(tài)結(jié)構(gòu)消失；低脂飼料組（LF）小鼠腎組織結(jié)構(gòu)分明，腎小管結(jié)構(gòu)清晰，未見明顯的腎組織結(jié)構(gòu)變化。而單純牙周炎組（HFP）小鼠腎組織與對照組（LFC）小鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰，無明顯結(jié)構(gòu)上的差異。
　?。?）Masson染色：四組小鼠腎組織均未見明顯的膠原纖維沉積。
　?。?）對于腎臟內(nèi)炎癥因子TNF-α、IL-1

14、β和IL-6的mRNA的表達(dá)，肥胖和牙周炎的交互效應(yīng)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.659，P=0.427；F=0.494，P=0.491；F=0.434，P=0.519），不同飼料組的TNF-α、IL-1β和IL-6的2-△△Ct值差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.498，P=0,49；F=0.298，P=0.484；F=0.066，P=0.396），不同結(jié)扎組的TNF-α、IL-6的2-△△Ct差別亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.244，P=0,627；

15、F=0.377，P=0.547），而不同結(jié)扎組的IL-1β的2-△△Ct值差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。真性結(jié)扎組（P）的IL-1β的2-△△Ct值顯著高于假性結(jié)扎組（C）（F=4.727，P=0.043）。T檢驗(yàn)分析顯示，兩個飼料組，兩個結(jié)扎組間炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的2-△△Ct值的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）IL-1β免疫組化染色：單純肥胖組（HFC）、肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）、單純牙周炎組（H

16、FP）的小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子IL-1β表達(dá)量均較對照組（LFC）高。T檢驗(yàn)分析顯示，單純牙周炎組（LFP）較對照組（LFP）腎組織內(nèi)IL-1β表達(dá)量顯著升高（P<0.005），而單純肥胖組（HFC）、肥胖復(fù)合牙周炎組（HFP）的小鼠腎組織內(nèi)炎癥因子IL-1β表達(dá)量無明顯差異，但均高于對照組（LFC）。
　　結(jié)論：
　　第一章、肥胖復(fù)合牙周炎小鼠模型建立成功。
　　第二章、牙周炎可能有刺激小鼠血清TNF-α、IL-β、I