染色體重組對(duì)大麥轉(zhuǎn)基因gfp遺傳表達(dá)的作用.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)為植物分子生物學(xué)基礎(chǔ)研究和作物遺傳改良等提供了新途徑，已成為植物生物技術(shù)的核心工具之一。然而利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室中獲得的新種質(zhì)材料不一定都能夠直接用于大規(guī)模的生產(chǎn)種植，因?yàn)橥庠椿蛟谒拗鲀?nèi)能否穩(wěn)定遺傳和表達(dá)是影響轉(zhuǎn)基因植物應(yīng)用前景的重要因素之一。 本試驗(yàn)利用已獲得的5種轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因(gfp)大麥：熒光表達(dá)量分別由高表達(dá)到不表達(dá)的F株系、C株系、A株系、B株系、D株系(轉(zhuǎn)基因沉默株系)，以及非轉(zhuǎn)基因系(Igri)

2、為材料，對(duì)不同轉(zhuǎn)基因植株間以及轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行常規(guī)有性雜交，分別對(duì)不同世代雜交植株的花粉、葉片、根中轉(zhuǎn)基因gfp的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定分析，得出以下結(jié)論：1.通過(guò)對(duì)根尖、葉片、花粉的分別測(cè)量發(fā)現(xiàn)，gfp基因在表達(dá)量上存在組織差異。2.通過(guò)對(duì)不同世代雜交植株進(jìn)行熒光測(cè)量發(fā)現(xiàn)，gfp基因在雜交后代中以一個(gè)顯性基因穩(wěn)定傳遞，轉(zhuǎn)基因可通過(guò)常規(guī)的有性雜交進(jìn)行傳遞。3.通過(guò)測(cè)交和自交等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，gfp基因在雜交后代中表達(dá)時(shí)存在明顯的劑量效應(yīng)。

3、 為了探討D株系的沉默機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)以大麥Actin基因作為內(nèi)參，通過(guò)擴(kuò)增大麥Actin基因并對(duì)其進(jìn)行定量，達(dá)到保證擴(kuò)增gfp基因的模板量一致的目的，這樣在PCR條件、模板量均一致且同批次反應(yīng)的條件下，擴(kuò)增各株系的gfp基因，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)各株系的g基因的轉(zhuǎn)錄水平。半定量RT-PCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)gfp基因D系大麥以及未轉(zhuǎn)基因大麥均未擴(kuò)增出gfp條帶，而A、B、C、F均擴(kuò)增出gfp條帶，且F系擴(kuò)增條帶較其他的株系擴(kuò)增條帶亮，這與熒光檢