常染色體顯性遺傳白內(nèi)障致病基因的研究.pdf

1、目的：對多個(gè)ADCC家系進(jìn)行研究，鑒定各自的致病基因。 方法： 1．收集ADCC家系，建立臨床和樣本數(shù)據(jù)庫。 2．位點(diǎn)的排除及確定：在14種已知ADCC基因位點(diǎn)附近5.0Mb范圍內(nèi)選擇2-3個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記位點(diǎn)，對家系進(jìn)行位點(diǎn)排除；對于LOD值(Lod Score值，表明疾病基因與該位點(diǎn)連鎖的緊密性大小)>2.0的位點(diǎn)，進(jìn)一步合成微衛(wèi)星標(biāo)記引物確證，最后查找相關(guān)基因序列，合成引物進(jìn)行測序，尋找確切的突變位點(diǎn)。

2、 3．對己排除位點(diǎn)的家系進(jìn)行遺傳連鎖分析：(1)對400多個(gè)STR標(biāo)記物(ABI PRISM Linkage Mapping Sets V2.5-MD)，PCR擴(kuò)增其片段，進(jìn)行全基因掃描。(2)用國際公認(rèn)的遺傳連鎖分析法，根據(jù)等位基因(單倍體)分型結(jié)果，結(jié)合兩點(diǎn)法和多點(diǎn)法，分別計(jì)算其LOD值，以最大LOD值確定陽性位點(diǎn)。(3)在陽性位點(diǎn)附近，根據(jù)熒光標(biāo)記的STR檢測結(jié)果，進(jìn)行更精細(xì)定位，確定疾病基因的最小遺傳間距MGI(Mininum

3、Genetic Interval)。 4．在MGI內(nèi)，通過候選基因法篩選致病基因及突變。 結(jié)果： 1．建立了幾種ADCC家系的臨床及遺傳資源信息數(shù)據(jù)庫。 2．完成多個(gè)ADCC家系的已知基因位點(diǎn)的排除。 3．完成一個(gè)家系的全線粒體基因組測序和全基因掃描，找到3個(gè)陽性位點(diǎn)。4．成功定位2個(gè)家系的基因突變位點(diǎn)：(1)一個(gè)白種人四代ADCC核性白內(nèi)障大家系(患者28名，非患者46名)，突變?yōu)槎ㄎ挥?q21

4、.1 GJA8基因第2個(gè)外顯子的262C>T(P88S)；(2)另一個(gè)漢族ADCC核性小家系(3名患者，2名非患者)突變?yōu)镚JA8基因的139G>T(D47Y)。 結(jié)論： 盡管發(fā)現(xiàn)的白種人的GJA8基因突變262C>T(P88S)，是已知基因的已知突變，但我們的結(jié)果為進(jìn)一步研究蛋白Cx50的功能，基因之間的相互作用及其對生長發(fā)育的調(diào)控提供了依據(jù)。同時(shí)也為由Cx50所致的遺傳性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)理的研究提供了有利的證據(jù)。而在漢

5、族家系發(fā)現(xiàn)的GJA8基因突變139G>T(D47Y)，是一個(gè)已知基因的新突變，國內(nèi)外從未報(bào)道過。我們認(rèn)為該突變可能發(fā)生在縫隙連接間第一個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，雖然能與細(xì)胞膜結(jié)合并形成完整的半GJ(gapjunction，縫隙連接)，但卻不能與鄰近細(xì)胞的半GJ接合形成完整的GJ，從而使相鄰細(xì)胞GJ的數(shù)量減少。該新生突變位于Cx50的第一信號區(qū)，參與調(diào)控細(xì)胞間電阻高低以利于小離子物質(zhì)在細(xì)胞間的通透。有關(guān)Cx50缺失的小鼠模型已有報(bào)道，小鼠發(fā)生了晶狀