MicroRNA-30a通過抑制Beclin1介導(dǎo)的自噬來減緩肝纖維化進(jìn)程.pdf

1、目的:
　　在這項(xiàng)研究中，我們旨在探討微小RNA-30a(miR-30a)在肝纖維化中的作用及其可能的作用機(jī)制。
　　材料和方法:
　　我們通過轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-B1)處理肝星狀細(xì)胞（大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6，人肝星狀細(xì)胞LX-2）構(gòu)建體外肝纖維化模型;我們通過在C57BL/6小鼠體內(nèi)進(jìn)行膽管結(jié)扎或者腹腔注射四氯化碳構(gòu)建體內(nèi)肝纖維化模型。我們通過在肝星狀細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-30a mimics使肝星狀細(xì)胞中高

2、表達(dá)miR-30a;通過在小鼠體內(nèi)注射miR-30a agomir(ago-miR-30a)使小鼠體內(nèi)高表達(dá)miR-30a。通過miRNA定量探針檢測miR-30a在肝星狀細(xì)胞內(nèi)和小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平。通過熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測miR-30a在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的定位情況。通過雙熒光素酶試驗(yàn)驗(yàn)證Beclin1是miR-30a的直接靶點(diǎn)。通過mRFP-GFP-LC3自噬雙熒光、電鏡和蛋白質(zhì)印跡檢測肝星狀細(xì)胞自噬水平。
　　結(jié)果:<

3、br>　　miR-30a在活化的肝星狀細(xì)胞和TGF-β1誘導(dǎo)的人肝星狀細(xì)胞LX-2的外泌體中表達(dá)明顯下調(diào)。過表達(dá)miR-30a使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的表達(dá)下調(diào)，例如α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)，金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)和Ⅰ型膠原(CollagenⅠ);同時(shí)miR-30a過表達(dá)抑制了肝星狀細(xì)胞的細(xì)胞活力。miR-30a在肝纖維化模型小鼠中表達(dá)顯著下調(diào)，然而，過表達(dá)miR-30a能抑制膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化進(jìn)程，伴隨

4、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)表達(dá)的下調(diào)。miR-30a抑制肝星狀細(xì)胞內(nèi)和小鼠纖維化肝組織中的肝星狀細(xì)胞的自噬，同時(shí)促進(jìn)了肝星狀細(xì)胞中脂滴的積聚。miR-30a通過直接靶向結(jié)合Beclin1的3'-UTR區(qū)域，從而抑制靶基因Beclin1的表達(dá)。此外，通過小干擾RNA(siRNA)沉默Beclin1的表達(dá)同樣能抑制人肝星狀細(xì)胞LX-2的自噬，并能抑制人肝星狀細(xì)胞LX-2的活化。
　　結(jié)論:
　　miR-30a在肝纖維化模型中表達(dá)下調(diào)，