microRNA-30a調(diào)控Beclin-1對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)自噬的作用.pdf

1、目的:
　　觀察microRNA-30a(miR-30a)在乳鼠原代心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧處理后的變化,并探討miR-30a調(diào)節(jié)缺血/再灌注誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬的分子機(jī)制。
　　方法與結(jié)果:
　　(1)構(gòu)建乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型,利用realtime-PCR技術(shù)精確定量對(duì)照組和H/R組miR-30a的表達(dá)水平,結(jié)果顯示H/R可誘導(dǎo)miR-30a表達(dá)下調(diào)(71.9±2.6

2、)％,P<0.01。
　　(2)重組構(gòu)建腺病毒表達(dá)載體(AD-rno-miR-NC、AD-rno-miR-30a及AD-rno-miR-30a-inhibition)感染原代乳鼠心肌細(xì)胞,使其過(guò)表達(dá)或低表達(dá)miR-30a,為進(jìn)一步探討miR-30a的表達(dá)變化對(duì)H/R誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬的影響做前提準(zhǔn)備。Realtime-PCR結(jié)果表明與感染AD-rno-miR-NC相比,感染AD-rno-miR-30a后,心肌細(xì)胞miR-30a表達(dá)

3、上調(diào)(15.61±0.21)倍,P<0.01;感染AD-rno-miR-30a-inhibition可使心肌細(xì)胞miR-30a表達(dá)下調(diào)(48.0±0.24)%,P<0.01。
　　(3)為了研究miR-30a調(diào)節(jié)缺血/再灌注誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬的分子機(jī)制,以AD-rno-miR-30a和AD-rno-miR-30a-inhibition感染心肌細(xì)胞,并進(jìn)行缺氧/復(fù)氧處理,以realtime-PCR、western blot及流式細(xì)胞

4、分析等方法分析Beclin-1、LC3B表達(dá)水平及凋亡等情況。
　　結(jié)果:
　　表明過(guò)表達(dá)miR-30a可降低缺氧/復(fù)氧后Beclin-1及LC3B蛋白水平的表達(dá)(P<0.01),增加缺氧/復(fù)氧后心肌細(xì)胞凋亡(P<0.01),而對(duì)Beclin-1及LC3B的mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯影響(P>0.05);低表達(dá)miR-30a可增加缺氧/復(fù)氧后Beclin-1及LC3B蛋白水平的表達(dá)(P<0.01),降低缺氧/復(fù)氧后心肌細(xì)胞凋亡(