大黃游離蒽醌對(duì)SAP大鼠腸淋巴系統(tǒng)免疫功能及腸道菌群的影響.pdf

1、目的:觀察大黃游離蒽醌對(duì)重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠腸淋巴系統(tǒng)特異性和非特異性免疫功能的影響，并探討腸道菌群變化與腸淋巴系統(tǒng)免疫功能間的相關(guān)性。
　　方法:(1)健康雄性SD大鼠18只，隨機(jī)分為:假手術(shù)(control，C)組、SAP模型(modle，M)組、大黃游離蒽醌干預(yù)(Free anthraquinone，F(xiàn))組。造模24 h后采集大鼠腸系膜淋巴結(jié)(mesenteric

2、lymph nodes，MLN)和小腸組織進(jìn)行石蠟包埋，另取部分MLN制備細(xì)胞懸液。光鏡下觀察MLN的HE染色病理組織學(xué)改變;免疫熒光法(Immunofluorescence，IF)測(cè)定MLN和小腸中核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體(nucleotide-binding oligomerization domain-likereceptors，NLRP3)與凋亡相關(guān)的斑點(diǎn)樣蛋白(apoptosis-associatedspeck-like

3、protein containing a CARD domain，ASC)的表達(dá);免疫組織化學(xué)（Immuno histochemistry, IHC）測(cè)定MLN和小腸半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的表達(dá)及小腸中SIgA的表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)(Flowcytometry, FCM)測(cè)定MLN細(xì)胞懸液的Th1/Th2比值及Foxp3標(biāo)記的Treg比例。(2)采用逆行胰膽管緩慢注射3.5％的無(wú)菌注射牛磺膽酸鈉制作大鼠SAP模型，健康

4、雄性SD大鼠18只，隨機(jī)分為:假手術(shù)(C)組、SAP模型(M)組、大黃游離蒽醌干預(yù)(F)組，造模后24 h，碘伏消毒肛門(mén)，EP管采集大鼠糞便，凍存于-80℃，超低溫冰袋運(yùn)送至上海微基生物科技有限公司進(jìn)行菌群分析。
　　結(jié)果:(1)所有大鼠的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌一致，均是擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)、變形菌門(mén)(Proteobacteria)和厚壁菌門(mén)（Firmicutes）。C組中擬桿菌門(mén)和厚壁菌門(mén)占的相對(duì)豐度比較大;變形菌的相對(duì)豐度

5、比很少。與C組相比較，M組的菌群中厚壁菌門(mén)與擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度比明顯降低，而變形菌門(mén)的相對(duì)豐度比顯著升高。F組厚壁菌門(mén)與擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度比較M組有所提高，變形菌門(mén)的相對(duì)豐度比例有所降低。M組多樣性較C組顯著降低，F(xiàn)組菌群多樣性有所升高。(2)光鏡下觀察大鼠小腸及MLN組織病理學(xué)改變，M大鼠小腸粘膜上皮變性壞死，絨毛脫落嚴(yán)重，粘膜及粘膜下血管擴(kuò)張、出血較多、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);F組小腸病變明顯減輕，部分絨毛融合、缺損，固有層充血水腫，有少量炎

6、性細(xì)胞浸潤(rùn)。M組較C組淋巴小結(jié)增大，皮質(zhì)區(qū)增厚，皮質(zhì)區(qū)淋巴小結(jié)數(shù)量增加;F組與M組相比較，皮質(zhì)區(qū)淋巴小結(jié)數(shù)量少，體積小。IF檢測(cè)顯示，M組大鼠小腸及MLN的NLRP3和ASC的表達(dá)均上調(diào);F組NLRP3和ASC的表達(dá)均有所下調(diào)。IHC法檢測(cè)顯示，M組大鼠小腸及MLN的Caspase-1表達(dá)明顯上調(diào);F組Caspase-1表達(dá)有所下調(diào)。而M組SIgA的表達(dá)明顯下調(diào);F組SIgA的表達(dá)有所上調(diào)。FCM檢測(cè)顯示，MLN中Th1的表達(dá)M組較C組

7、明顯上調(diào)(P＜0.05);F組較M組下調(diào)(P＜0.05)。Th2的表達(dá)M組較C組明顯下調(diào)(P＜0.05);F組較M組明上調(diào)（P＜0.05）。M組Th1/Th2比例較C組明顯上調(diào)(P＜0.05);F組較M組下調(diào)（P＜0.05）。M組的CD4+CD25+Foxp3+明顯高于C組(P＜0.05);F組與M組相比較顯著降低(P＜0.05)。M組的Treg比例明顯高于C組(P＜0.05);F組與M組相比較顯著降低(P＜0.05)。(3)腸道菌群變

8、化與腸淋巴系統(tǒng)免疫功能間的相關(guān)性分析表明:菌群多樣性分別與小腸及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01);與SIgA、Th2表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P＜0.01)。變形菌門(mén)數(shù)量分別與小腸及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P＜0.01);與SIgA、Th2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。擬桿菌門(mén)和厚壁菌門(mén)與腸淋巴系統(tǒng)免疫應(yīng)答間的相關(guān)性均不